[发明专利]一种基于COI基因序列的*和贝氏*的分子鉴别方法

权利要求书

1.一种和贝氏的分子鉴别方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)分别提取待鉴定的和贝氏基因组DNA；

(2)以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增与贝氏的细胞色素氧化酶亚基I基因,PCR扩增使用的上游引物为F：SEQ ID NO.1，下游引物为R：SEQ ID NO.2；

(3)扩增产物纯化后，直接测序，的COI基因扩增产物如SEQ ID NO.3所示,贝氏的COI基因扩增产物如SEQ ID NO.4所示；COI基因第18位点碱基是T的为贝氏，若该位点是C的为。

2.根据权利要求1所述的分子遗传方法,其特征在于所述的PCR反应体系为50μL：80ng/μL的模板DNA 1μL，PCR缓冲液5μL，dNTP混合液4μL，每种dNTP 0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2.5IU的Taq酶；双蒸水36μL；所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01％(g/100ml)明胶组成；PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火40s，72℃延伸60s，经30个循环后再72℃延伸10min。

3.一种用于与贝氏的分子鉴别的引物对，其特征在于上游引物为F：SEQ ID NO.1，下游引物为R：SEQ ID NO.2。

4.权利要求3所述的引物对在分子鉴别与贝氏中的应用。

5.权利要求3所述的引物对在制备与贝氏分子鉴别试剂中的应用。

6.一种与贝氏分子鉴别试剂，其特征在于包含权利要求3所述的引物对。

7.根据权利要求6所述的与贝氏分子鉴别试剂，其特征在于还包括PCR缓冲液和dNTP混合液，所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/LMgCl₂，0.01％明胶组成。