[发明专利]一种基于人肝实质细胞用于功能性食品功效检测的方法

说明书

一种基于人肝实质细胞用于功能性食品功效检测的方法，包括人肝实质细胞的诱导分化步骤、肝实质细胞的检验方法和细胞培养上清液中肝细胞生长因子、白蛋白和尿素含量的测定。本发明的有益效果是：可以缩短整个评价实验的时间，节约大量的成本，且检测结果能完全客观反映并正确评价功能性食品对人体的影响。

技术领域

本发明涉及功能性食品功效检测，具体涉及一种基于人肝实质细胞用于功能性食品功效检测的方法。

背景技术

目前，我国食品类目中并没有出现功能性食品这一类目，许多人将功能性等同于保健食品，但其实就国外功能性食品的定义与要求来讲，我国的保健食品理念与其是有明显差别的。我国保健食品概念为：保健食品是指声称并具有特定保健功能或者以补充维生素、矿物质为目的的食品，即适用于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的，并且对人体不产生任何急性、亚急性或慢性危害的食品。虽然功能性食品的概念在世界各国有所不同，但一般认为它应具有三个基本属性，包括：①食品基本属性，也就是有营养还要保证安全；②修饰属性，也就是具备色、香、味，能使人产生食欲；③功能属性，也就是对机体的生理机能有一定的良好调节作用，而且经过科学验证是肯定的。④非药品属性，不以治疗为目的，不能取代药物对患者的治疗作用；其中功能属性的诉求在国内市场越来越大，功能性食品的开发也得到相应的发展。

功能性食品的研究与开发在我国尚属新兴学科和领域，现有功能性食品的评价主要包括毒理学评价、功能性评价和卫生学评价。其中，功能性评价是功能性食品科学研究的核心内容，其主要针对功能食品所宣称的生理功效进行动物实验甚至是人体实验。许多功能性食品仅靠动物试验得来的数据推测其功效性，由于动物与人在生理、遗传等方面的差异，使得评价结果不能完全客观反映并正确评价功能性食品对人体的影响。

因而，急需加强功能性食品作用机理及评价技术研究，并建立合理的评价体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于人肝实质细胞用于功能性食品功效检测的方法，其可以缩短整个评价实验的时间，节约大量的成本，且检测结果能完全客观反映并正确评价功能性食品对人体的影响。

本发明的目的是通过这样的技术方案实现的，一种基于人肝实质细胞用于功能性食品功效检测的方法，包括以下步骤：

S1,取功能性食品试样用超声波溶于超纯水，制成浓度为0.01mg/mL的受试悬液；

S2，取六孔细胞培养板，按照细胞数(1-2)×10⁶每孔的密度接种肝实质细胞并设置样品组、阳性对照组和阴性对照组，样品组每孔加入200-300μL试样悬液，阳性对照组每孔加入200-300μL肝实质细胞培养基(Williams Medium E，Thermo Fisher)，阴性对照组每孔加入200-300μL纯水；

S3，样品组、阳性对照组和阴性对照组每孔再加入1-2mL肝实质细胞培养基，将细胞置于37℃、5％CO₂培养箱中培养24h；

S4，样品组、阳性对照组中每孔加入ConA溶液100-200μL，使终浓度为1μg/mL，阴性对照组加入等量的超纯水，细胞置于37℃、5％CO₂培养箱中培养2.5-4h；

S5，用细胞凋亡检测试剂盒检测肝实质细胞的凋亡情况，严格按照试剂盒说明书操作；

S6，用流式数据分析软件打开数据文件，区分出死细胞群、活细胞群和凋亡细胞群，并统计各自的百分比。