[发明专利]一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法

说明书

本发明公开了一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域；通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸；与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值；降低检测工作量以及提高检测效率。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法。

背景技术

现代医学认为，人们对酒精的耐受性的表现不同，主要与其自身的酒精代谢能力(酒精敏感度)有关，其关键在于基因；不同的基因决定了人们对酒精的敏感度和代谢能力。

对人体内与酒精代谢相关的基因的检测是非常有必要的，能给于人们对自身酒精代谢能力的认知，便于控制自身酒精的摄入量。

研究发现乙醇脱氢酶ADH1B(rs1229984)基因和乙醛脱氢酶ALDH2(rs671)基因变异，会影响酒精的代谢；而关于乙醇脱氢酶ADH1B(rs1229984)基因和乙醛脱氢酶ALDH2(rs671)基因的检测，传统的SNP位点检测技术，一次只能检测其中的一种基因，导致检测工作量大。

发明内容

传统的SNP位点检测技术存在的一次只能检测其中的一种基因，导致检测工作量大的问题，本发明提供了一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法。

本发明所采用的技术方案为：一种酒精代谢相关基因突变位点的检测方法，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；

其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。

在其中一个实施例中，所述目标位点特异性引物包括：

用于扩增酒精代谢相关基因ADH1B-RS1229984片段的第一特异性引物，第一特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：1所示且反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNos：2所示；

SEQ ID Nos：1为：acgttggatggtcaccaggttgccactaac；

SEQ ID Nos：2为：acgttggatgtctgtagatggtggctgtag。

用于扩增酒精代谢相关基因ALDH2-RS671片段的第二特异性引物，第二特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：3所示且反向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：4所示；

SEQ ID Nos：3为：acgttggatgaggtcccacactcacagttt；

SEQ ID Nos：4为：acgttggatgttggtggctacaagatgtcg。

在其中一个实施例中，所述单碱基延伸技术所用的引物包括：

用于扩增酒精代谢相关基因ADH1B-RS1229984片段的第一单碱基延伸引物，核苷酸序列如SEQ ID Nos：5所示；SEQ ID Nos：5为cacgtggtcatctgtg；

用于扩增酒精代谢相关基因ALDH2-RS671片段的第二单碱基延伸引物，核苷酸序列如SEQ ID Nos：6所示；SEQ ID Nos：6为cactcacagttttcactt。