[发明专利]一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法

说明书

本发明公开了一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法，涉及生物医学技术领域，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸；本发明所述的检测基因突变的方法与传统的SNP位点检测技术相比，可以在一个反应中实现多个SNP位点的检测，具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法。

背景技术

维生素E是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一，可减轻自由基对生物膜的破坏作用，避免过度氧化自由基对内皮细胞的损伤。首次从麦芽中分离出来的，主要贮存在脂肪组织中。

维生素E吸收与肠道脂肪有关，影响脂肪吸收的因素也影响维生素E吸收。大部分被吸收的维生素E通过乳糜微粒到肝脏，为肝细胞所摄取。多种基因影响人体对维生素E的吸收和代谢，比如人体内参与脂质的代谢的CYP4F2基因，属于P450家族，存在于细胞的内质网；ZPR1基因，其携带G等位基因群体的血清维生素E浓度较C等位基因携带群体高。这些基因均通过影响脂质的吸收代谢来影响维生素E的吸收和代谢。

这些基因多态性的筛查能帮助个体充分了解自己的遗传状况，提前采取相应的健康管理措施。

这些基因多态性的筛查一般采用传统的SNP位点检测技术，而传统的SNP位点检测技术一次只能检测其中的一种基因，导致检测工作量大。

发明内容

为了解决传统的SNP位点检测技术一次只能检测其中的一种基因，导致检测工作量大的问题，本发明提供了一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法。

本发明所采用的技术方案为：一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法，通过设计的目标位点特异性引物的单管多重PCR扩增反应得到目标片段，目标片段经过限制性内切酶消化，然后再利用单碱基延伸技术对经过限制性内切酶消化的目标片段进行双向延伸，得到待检基因位点，最后通过核酸质谱分析精确测定目标DNA序列；

其中，所述单碱基延伸技术是采用单碱基延伸引物组对所述目标片段进行双向延伸。

在其中一个实施例中，所述目标位点特异性引物包括：

用于扩增维生素E吸收相关基因CYP4F2-RS2108622片段的第一特异性引物，第一特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：1所示且反向引物的核苷酸序列如SEQID Nos：2所示；SEQ ID Nos：1为：acgttggatgctaggagccttggaatggac；SEQ ID Nos：2为：acgttggatgtgcctcatcagtgttttcgg；

用于扩增维生素E吸收相关基因ZPR1-RS964184片段的第二特异性引物，第二特异性引物的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：3所示且反向引物的核苷酸序列如SEQ IDNos：4所示；SEQ ID Nos：3为：acgttggatgggaacttgaa gtctagtggg；SEQ ID Nos：4为：acgttggatgcctccatgacactaatcacc。

在其中一个实施例中，所述单碱基延伸技术所用的引物包括：

用于扩增维生素E吸收相关基因CYP4F2-RS2108622片段的第一单碱基延伸引物，第一单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID Nos：5所示；SEQ ID Nos：5为：cccgaacctcagggtccggccaca；