[发明专利]基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法

说明书

本发明公开了一种基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法，通过对苎麻不同品种的不同器官干燥、粉碎、萃取、过滤和洗涤后，可以得出其草粉提取物可安全、有效地替代抗生素的苎麻品种及器官，对苎麻干粉绿原酸提取技术的转化、推广，推动我国抗生素替代方面的发展具有十分重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法。

背景技术

医药领域最伟大的成就包括抗生素与合成抗菌药物的发明应用，但细菌耐药现象也成为不可忽视的事实。据统计，我国每年有8万人直接或间接死于滥用抗生素，因此，该问题成为人们关注的焦点。最受人们关注的是,长期采食添加抗生素饲料的动物，其体内的微生物产生抗药性后通过食物链进入人体，所导致人类医学中使用该抗生素时也发生抗药性的问题。中草药作为一种绿色无害的天然添加剂，可直接或间接作用于细菌，病原体等有害微生物，而且不产生耐药性。绿原酸(Chlorogenic acid)，又名咖啡鞣酸，即3-咖啡酰奎宁酸，分子式：C16H18O9，分子量：354.31。人们对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域，而且它是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。目前，我国提取绿原酸的主要原料是金银花和杜仲。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法，通过对苎麻不同品种的不同器官干燥、粉碎、萃取、过滤和洗涤，可以得出其草粉提取物可安全、有效地替代抗生素的苎麻品种及器官。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法，包括如下步骤：

S1、收获乐业灰绿苎、桐木苎麻、湘饲纤兼用苎麻1号、红尖麻、芦竹青的头麻；

S2、将步骤S1中收获的各个苎麻品种收获后的头麻均分为叶片、萝卜根和繁殖根三部分器官并置于烘箱中，105℃杀青0.5h后，65℃烘干至恒重，粉碎，过筛备用；

S3、对步骤S2中粉碎过筛后得到的各个苎麻品种的不同器官的苎麻干粉分别进行绿原酸提取液的提取：取苎麻干粉加入pH值调为4的50％的乙醇浸泡24h，40℃下超声波辅助萃取30min，过滤，洗涤；如此重复2次，合并滤液，110℃常压蒸馏至乙醇挥发完全，得到苎麻干粉的绿原酸提取液；

S4、筛选：

(1)对步骤S3中得到的各个苎麻品种的不同器官的苎麻干粉的绿原酸提取液分别进行如下操作：在无菌工作台上将细菌的菌悬液分别加入至苎麻干粉的绿原酸提取液、pH值调为4的50％的乙醇、灭菌水形成三个处理组并放置于37℃，170r/min的摇床培养48h，以50％的乙醇菌液为空白，在600nm处测定吸光度；获得不同苎麻品种的不同器官干粉绿原酸的含量，每个苎麻品种均显示叶片干粉的绿原酸含量最高；

(2)对各个苎麻品种的叶片干粉的绿原酸提取液分别进行如下操作：取普通肉汤琼脂培养基融化于平板上，待凝固后加入细菌的菌悬液，均匀涂抹；将无菌滤纸片浸泡于叶片干粉的绿原酸提取液中，贴在有菌的平板上，37℃恒温培养箱培养24h,游标卡尺测量抑菌圈直径大小，三组重复，抑菌圈直径大小取三组平均；获得不同苎麻品种的叶片干粉的绿原酸提取液对细菌的抑菌效果；

采用KB-滤纸片法测量不同浓度抗生素抑菌圈直径大小，每个浓度的药敏片三组重复，抑菌圈直径取平均值；药物对细菌抑制作用标准：无抑菌圈为无敏，抑菌圈直径＜10mm，低度敏感；10mm≤抑菌圈直径≤15mm,中度敏感；抑菌圈直径＞15mm，高度敏感；获得抗生素对细菌的抑菌效果；

将不同苎麻品种的叶片干粉的绿原酸提取液对细菌的抑菌效果与抗生素对细菌的抑菌效果进行比较，筛选得到叶片干粉绿原酸提取液的抑菌效果最佳的苎麻品种。