[发明专利]基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法

权利要求书

1.基于绿原酸提取液制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、收获乐业灰绿苎、桐木苎麻、湘饲纤兼用苎麻1号、红尖麻和芦竹青的头麻；

S2、将步骤S1中收获的各个苎麻品种收获后的头麻均分为叶片、萝卜根和繁殖根三部分器官并置于烘箱中，105 ℃杀青0.5 h后，65℃烘干至恒重，粉碎，过筛备用；

S3、对步骤S2中粉碎过筛后得到的各个苎麻品种的不同器官的苎麻干粉分别进行绿原酸提取液的提取：取苎麻干粉加入pH值调为4的50 %的乙醇浸泡24 h，40 ℃下超声波辅助萃取30 min，过滤，洗涤；如此重复2次，合并滤液，110 ℃常压蒸馏至乙醇挥发完全，得到苎麻干粉的绿原酸提取液；每1g苎麻干粉加入50 mL pH值调为4的50%的乙醇;

S4、筛选：

（1）对步骤S3中得到的各个苎麻品种的不同器官的苎麻干粉的绿原酸提取液分别进行如下操作：在无菌工作台上将细菌的菌悬液分别加入至苎麻干粉的绿原酸提取液、pH值调为4的50%的乙醇、灭菌水形成三个处理组并放置于37 ℃，170 r/min的摇床培养48 h，以50%的乙醇菌液为空白，在600 nm处测定吸光度；获得不同苎麻品种的不同器官干粉绿原酸的含量，每个苎麻品种均显示叶片干粉的绿原酸含量最高；

（2）对各个苎麻品种的叶片干粉的绿原酸提取液分别进行如下操作：取普通肉汤琼脂培养基融化于平板上，待凝固后加入细菌的菌悬液，均匀涂抹；将无菌滤纸片浸泡于叶片干粉的绿原酸提取液中，贴在有菌的平板上，37℃恒温培养箱培养24h,游标卡尺测量抑菌圈直径大小，三组重复，抑菌圈直径大小取三组平均；获得不同苎麻品种的叶片干粉的绿原酸提取液对细菌的抑菌效果；

采用KB-滤纸片法测量不同浓度抗生素抑菌圈直径大小，每个浓度的药敏片三组重复，抑菌圈直径取平均值；药物对细菌抑制作用标准：无抑菌圈为无敏，抑菌圈直径＜10mm，低度敏感；10mm≤抑菌圈直径≤15mm,中度敏感；抑菌圈直径＞15mm，高度敏感；获得抗生素对细菌的抑菌效果；

将不同苎麻品种的叶片干粉的绿原酸提取液对细菌的抑菌效果与抗生素对细菌的抑菌效果进行比较，筛选得到叶片干粉绿原酸提取液的抑菌效果最佳的苎麻品种为桐木苎麻；

所述细菌包括大肠杆菌和沙门氏菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4的第（1）部分中，细菌的菌悬液和苎麻干粉的绿原酸提取液、pH值调为4的50 %的乙醇、灭菌水的体积比均为1:5。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4的第（2）部分中，普通肉汤琼脂培养基和细菌的菌悬液的体积比为100:1。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，普通肉汤琼脂培养基的制备过程如下：取蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，调节pH值7.2，121℃，高压灭菌20min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4的第（2）部分中，采用KB-滤纸片法测量不同浓度抗生素抑菌圈直径大小的具体过程为：配制1g/mL的抗生素溶液，取13支无菌小试管，除第1支外，每支试管加入3mL无菌水，取3mL 1g/mL的药液于第2支试管中，混匀后取3mL于第3支试管中，以此类推，到第13支时，弃去3mL，KB-滤纸片法测量不同浓度抗生素抑菌圈大小，每个浓度的药敏片三组重复，抑菌圈直径取平均值。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述抗生素包括金霉素。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，细菌菌悬液的制备过程为：将普通营养肉汤培养基放入高压灭菌处理过的锥形瓶内，接种细菌，接种后放置于37℃，170r/min的摇床培养48h，600nm处测定吸光度值在1.1-1.2范围内，放入4℃冰箱内备用。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，普通营养肉汤培养基的制备过程为：取蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，调节pH值7.2，121℃，高压灭菌20min制备得到。