[发明专利]用于大肠杆菌O157:H7血清型致病菌检测的试剂、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种检测试剂，其特征在于包括：主要由第一引物和第二引物组成的引物对、氯化血红素溶液、氯化钾溶液、HEPES 缓冲溶液、显色A液、显色B液、终止液、DNA聚合酶、PCR常规组件、二甲基亚岚、L-半胱氨酸盐酸盐、柠檬酸、浓硫酸、亚硫酸钠、甘油、过氧化氢、乙酸钠和EDTA二钠盐，

所述第一引物和第二引物的序列分别如SEQ ID NO：1 、SEQ ID NO：2所示，所述第一引物、第二引物的5’端具有串联重复鸟嘌呤(G)且能形成核酸拟酶的互补序列；

所述HEPES 缓冲溶液包含25 m M Hepes、 20 m M KCl、200 m M NaCl、0.025% (w/v)Triton X-100、1% (v/v) DMSO，所述HEPES 缓冲溶液的pH为7.4；

所述显色A液包含乙酸钠、柠檬酸、亚硫酸钠和过氧化氢，所述显色B液包含EDTA二钠盐、柠檬酸、甘油、L-半胱氨酸盐酸盐和TMB。

2.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的检测试剂。

3.一种应用于大肠杆菌O157:H7血清型致病菌检测方法的产品，其特征在于：所述产品包括权利要求1所述检测试剂或权利要求2所述试剂盒，并且，所述检测方法包括：

利用所述引物对，通过PCR扩增反应对从待测样品内提取到的核酸进行扩增；

将PCR扩增后的产物与氯化血红素溶液、氯化钾溶液、HEPES 缓冲溶液混合形成第一混合体系，加热解链后恒温孵育；

将孵育后的第一混合体系与所述显色A液和显色B液混合形成第二混合体系，并通过观察第二混合体系的颜色或检测第二混合体系的OD值实现对待测样品内大肠杆菌O157:H7血清型致病菌的定性或定量检测。

4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：所述PCR扩增反应的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec，扩增30个循环，充分延伸72℃10min。

5.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述检测方法包括：将所述第一混合体系于95℃左右条件下加热解链，之后快速降温至4℃以下孵育。