[发明专利]一种大豆疫霉抑制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种大豆疫霉抑制剂，其特征在于：包括没食子酸丙酯和癸醇，癸醇作为没食子酸丙酯的助溶剂，其用量比例为：0.1mg-0.3mg的癸醇：1-2mmol的没食子酸丙酯。

2.根据权利要求1所述的一种大豆疫霉抑制剂，其特征在于：所述没食子酸丙酯采用超临界二氧化碳萃取方法，包括如下步骤：

(1)精确称取颗粒大小在2-5mm大小的赤芍粉1.3-1.8kg，将其加入17-22％的温度为6-8℃的纯水中，在5℃条件下放置50-70分钟，超临界二氧化碳萃取中，超临界二氧化碳提取压力为33-37MPa，提取时间为54-57分钟，二氧化碳流率为4.5-5.7L/min，即可提取出没食子酸丙酯粗提物；

(2)没食子酸丙酯纯化：将(3)中没食子酸丙酯粗提物按照1:5的质量比溶于85-90℃的热水中，用截留分子量10kDa的超滤膜超滤去大分子杂质；然后用旋转蒸发仪中浓缩至没食子酸丙酯含量大于20-50mg/L；

(3)结晶纯化与干燥：将(4)中的没食子酸丙酯转移到50ml的离心管中，4-6℃下放置12小时后有沉淀出现在离心管底部，在10000rpm/min下离心5分钟，去上清，液氮速冻沉淀后，在-60℃、真空度为45的真空条件下冷冻干燥，待干燥至粉末，即获得没食子酸丙酯。

3.根据权利要求1所述的一种大豆疫霉抑制剂，其特征在于：所述没食子酸丙酯还可由没食子酸和丙醇在单宁酶的催化下制备，包括如下制备步骤：

(1)没食子酸提取工艺：采用超临界二氧化碳萃取方法，称取颗粒大小在2-5mm大小的蓝莓叶子或绿茶叶粉1.3-1.8kg，将其加入17-22％的温度为2-8℃的纯水中，在5℃条件下放置50-70分钟，超临界二氧化碳萃取中，超临界二氧化碳提取压力为23-27MPa，提取时间为32-50分钟，即可提取出没食子酸；

(2)单宁酶制备工艺：黑曲霉在液体土豆培养基中培养3-5天，过滤收集发酵液，用硫酸铵沉淀法沉淀，复溶提取粗蛋白，用截留分子量10kDa的超滤膜超滤去硫酸铵并浓缩蛋白，即得到单宁酶；

(3)没食子酸丙酯合成方法：将8.9mmol没食子酸溶于8.2％-13.6％丙醇溶液中，加入0.3-0.6mol的单宁酶在二氧化碳培养箱中，在20℃恒温条件下催化反应10-15小时，在-60℃、真空度为45的真空条件下冷冻干燥，待干燥至粉末，即获得没食子酸丙酯。

4.一种大豆疫霉抑制剂，其特征在于：大豆疫霉抑制剂的制备方法为没食子酸丙酯与癸醇混合：将0.1mg-0.3mg的癸醇，1-2mmol的没食子酸丙酯混合，完全溶解后依次添加60-70℃的热水和20-25℃常温水各500mL，即可以得到大豆疫霉抑制剂。