[发明专利]一种RB1突变基因、引物、检测方法、试剂盒及应用

说明书

本发明公开一种RB1突变基因、引物、检测方法、试剂盒及应用。相较于传统生物标志物，本发明发现的基因突变位点稳定、微创、易于检测，将明显提高疾病诊断的敏感性和特异性。本发明所发现的RB1基因1号外显子c.116位点突变，可用于早期筛查视网膜母细胞瘤基因突变携带者，进而提供遗传咨询和优生优育指导；同时，也可用于开发诊断试剂盒，为视网膜细胞瘤患者提供分子诊断依据。本发明为视网膜母细胞瘤的发病机制研究奠定了重要基础，也为视网膜母细胞瘤患者的治疗提供可能的药物靶点。

技术领域

本发明涉及分子生物学与生物技术领域，尤其涉及一种RB1突变基因、 引物、检测方法、试剂盒及应用。

背景技术

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)起源于视网膜胚胎核层细胞， 是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，发病率为1：14000–20000。其临床表现 有白瞳症、知觉性斜视、眼红痛，角膜混浊和无菌性眼眶蜂窝织炎。由于 90％RB患儿在3岁以前发病，早期不易发现。虽然手术及放射疗法、化学 疗法等综合辅助治疗的进步可改善患者的预后，但全球范围内，特别是发 展中国家，RB的死亡率及继发肿瘤发生率仍然较高。有数据显示，中国 RB患儿的生存率仅为63％，远低于发达国家的95％。因此，做好RB的防 治工作具有重要意义。

已有的研究证明，视网膜母细胞瘤基因1(Retinoblastoma1,RB1)是人类 第一个分离克隆的抑癌基因，该基因突变与RB的发生密切相关。RB1基 因位于13号染色体长臂(13q14.1-q14.2)上，全长180kb，包括27个外显 子和26个内含子，编码产物是分子量为110kD的核磷酸蛋白pRb。pRb包 含N-末端结构域、A/B口袋结构域以及C-末端结构域。pRb蛋白可与E2F 家族转录因子结合，抑制G1向S期转换相关基因的转录，从而造成细胞周 期停滞。而且，pRb也可通过调节组织特异性转录因子来调节细胞分化， 维持细胞周期退出。而当RB1基因发生突变，pRb蛋白可出现功能障碍或 缺失，导致E2F的恒定活性和细胞周期的持续激发，促进肿瘤发展。另外， 根据RB1突变的遗传特点，可将RB分为以下三类：60％RB患者因非遗传 性体细胞突变而致病；30％具有新发生殖细胞突变，无家族史，但具有遗传性；其余10％携带家族性生殖细胞突变，存在阳性家族史。生殖细胞突变 者以常染色体显性方式遗传，外显率90％左右，这类患者发病年龄小，多 为双眼发病，RB复发或新发第二肿瘤的风险较高；体细胞突变者发病年龄 大,多为单眼发病，肿瘤复发或新发第二肿瘤的风险与常人一致。

因此，检测RB1基因突变具有重要临床意义。一方面，对可能存在RB 危险的婴幼儿进行基因检测，将有助于判断其危险性：对于携带致病基因 的患儿，应当定期行眼底检查，以期尽早诊断RB，保留眼球和有效视力。 相反，对于无致病基因的婴幼儿，可减少随诊频率，节约医疗资源和医疗 成本；另一方面，RB的基因诊断信息还可以运用于产前诊断和遗传咨询。 对携带或可能携带RB突变基因的妊娠妇女及配偶进行产前诊断，通过选择 性流产避免RB患儿的出生或早期临床诊断RB，进而改善出生人口质量及 提高患儿的生存率和生活质量。另外，检测RB1基因突变，可丰富基因谱， 加深对RB病变及耐药机制的认识，为抗RB个性化药物的研发提供新思路 和实验基础。尽管RB1基因检测对RB的早期诊断及遗传咨询具有重要意 义，但由于RB1基因突变类型各异，分布广泛，没有明确的突变热点，仍 存在着相当一部分未知致病基因位点。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的是寻找与视网膜母细胞瘤相 关的高特异性的突变位点，并研制出可供临床应用的视网膜母细胞瘤辅助 诊断试剂盒，为视网膜母细胞瘤的筛查和诊断提供支持。

本发明的技术方案如下：

一种用于视网膜母细胞瘤辅助诊断的RB1突变基因，其中，所述RB1 突变基因与RB1正常基因序列相比有1号外显子c.116位点突变。