[发明专利]一种RB1突变基因、引物、检测方法、试剂盒及应用在审
| 申请号： | 201910796656.1 | 申请日： | 2019-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN110484623A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 李发科;许雪青;王丰;符胜煜;谢小红;雷佳凡;李欢;闫睿 | 申请（专利权）人： | 深圳市宝安区妇幼保健院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 44395 广东良马律师事务所 | 代理人： | 李良<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 518100 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 视网膜母细胞瘤 可用 视网膜母细胞瘤基因 发病机制研究 基因突变位点 视网膜细胞 诊断试剂盒 传统生物 分子诊断 疾病诊断 突变基因 位点突变 药物靶点 遗传咨询 早期筛查 重要基础 优生优育 标志物 试剂盒 检测 微创 引物 突变 发现 携带 基因 治疗 应用 开发 | ||
1.一种用于视网膜母细胞瘤辅助诊断的RB1突变基因，其特征在于，所述RB1突变基因与RB1正常基因序列相比有1号外显子c.116位点突变。
2.根据权利要求1所述的RB1突变基因，其特征在于，所述RB1突变基因与RB1正常基因序列相比，1号外显子c.116位点突变为由C碱基变为A碱基。
3.一种检测RB1基因的突变位点的特异性测序引物，其特征在于，所述特异性测序引物的上游引物为5′-ccggtttttctcaggggacgttg-3′，所述特异性测序引物的下游引物为5′-cgcccgccctacgcacac-3′。
4.一种用于检测RB1基因的突变位点的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
抽提基因组DNA；
使用PCR扩增特异性测序引物；
采用Sanger测序；
以及根据Sanger测序结果判断RB1基因是否发生突变；
其中，所述特异性测序引物的上游引物为5′-ccggtttttctcaggggacgttg-3′，所述特异性测序引物的下游引物为5′-cgcccgccctacgcacac-3′。
5.根据权利要求4所述的用于检测RB1基因的突变位点的检测方法，其特征在于，采用通用方法或试剂盒从外周血白细胞中提取基因组DNA。
6.根据权利要求5所述的用于检测RB1基因的突变位点的检测方法，其特征在于，所述抽提基因组DNA的步骤还包括：对提取的基因组DNA进行去除蛋白质处理，然后沉淀及洗涤基因组DNA。
7.根据权利要求4所述的用于检测RB1基因的突变位点的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增包括如下步骤：
预热；
扩增循环阶段；
微反应；
冷却。
8.一种诊断视网膜母细胞瘤的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒组分中含有检测RB1基因1号外显子c.116位点突变的试剂，所述试剂中包含检测RB1基因的突变位点的特异性测序引物，所述特异性测序引物的上游引物为5′-ccggtttttctcaggggacgttg-3′，所述特异性测序引物的下游引物为5′-cgcccgccctacgcacac-3′。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括：模板DNA、缓冲液、MgCl2、dNTP和Taq聚合酶。
10.一种RB1突变基因在制备视网膜母细胞瘤临床诊断产品中的应用，其特征在于，所述RB1突变基因具有1号外显子c.116位点突变。
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