[发明专利]一种提高环介导等温扩增反应效率的方法及应用

权利要求书

1.一种提环介导等温扩增反应效率的方法，其特征在于，通过向环介导等温（LAMP）扩增反应体系中添加富勒烯材料来实现对LAMP扩增的优化，包括如下步骤：

（1）LAMP扩增反应体系优化：将富勒烯加入LAMP扩增反应体系当中，然后进行LAMP扩增；

（2）LAMP扩增产物检测：可通过电泳检测、浊度检测或显色检测。

2.根据权利要求1所述的一种提高LAMP扩增反应效率的方法， 其特征在于，在25 µL的LAMP扩增反应体系中加入富勒烯的终浓度为0.25-40 μg/L。

3.根据权利要求1或2所述方法在致病微生物检测中的应用。

4.根据权利要求1或2所述方法在检测肉品掺假中的应用。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，LAMP扩增反应体系包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，环引物LF和LB，Bst DNA聚合酶，10×聚合酶缓冲液，dNTP，Mg²⁺，甜菜碱，富勒烯，双蒸水中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述LAMP扩增反应体系包括外引物F3和B3各0.2 μmol/L，内引物FIP和BIP各1.6 μmol/L，Bst DNA聚合酶8U，1×聚合酶缓冲液，dNTP1.0-1.6 mmol/L，Mg²⁺ 2-9 mmol/L，甜菜碱0-1.5 mol/L，富勒烯0.25-40 μg/L，环引物LF和/或LB各0.8 μmol/L。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，1× Bst DNA聚合酶反应缓冲液选用1×Thermopol反应缓冲液，包含Tris-HCl (pH 8.8) 20 mmol/L，KCl 10 mmol/L， (NH4)₂SO410 mmol/L，0.1% Triton X-100，MgSO₄ 2 mM；1× Bst DNA聚合酶反应缓冲液中的MgSO₄和酶反应体系中的镁离子Mg²⁺做合并处理；恒温扩增反应的反应程序为①60～65℃孵育10～90 min；②80℃终止反应2~20 min。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述LAMP扩增反应体系包括外引物F3和B3各0.2 μmol/L，内引物FIP和BIP各1.6 μmol/L，Bst DNA聚合酶8U，1×聚合酶缓冲液，dNTP1.0-1.6 mmol/L，Mg²⁺ 2-9 mmol/L，甜菜碱0-1.5 mol/L，富勒烯0.25-40 μg/ L。