[发明专利]含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物及其制备方法和应用，所述免疫原性组合物包括以兔葡萄球菌抗原、分散载体、水性打印佐剂混合物作为打印喷涂液，以及以冻干保护粉剂作为铺粉，采用3DP打印技术将所述打印喷涂液反复喷涂在每层铺粉上，得到三维立体结构的含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物。由本发明方法制备的免疫原性组合物具有良好的免疫原活性以及免疫保护性，能够有效用于兔金黄色葡萄球菌的防治，免疫保护率高达100％，且疫苗稳定性好不易失活。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物及其制备方法和应用。

背景技术

人是金黄色葡萄球菌(S.aureus)的天然储存宿主。健康个体可以被金黄色葡萄球菌持续(10-35％)、间歇(20-75％)或以非携带状态(5-70％)定殖在皮肤上、鼻孔和咽喉中，而没有相关疾病。巨大的人储存宿主提高了适应的致病性克隆类型演化和传播的机会。特别关注来自革兰氏阳性球菌金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的侵入性葡萄球菌感染，因为它们是日益增加的全球性公共健康问题。具体而言，金黄色葡萄球菌是造成大多数医院获得性(医院)感染的原因，并且其在社区发病感染中的流行增加。例如，2005年在美国侵入性抗甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的发生率估计为31.8/100000人，包括18，650例死亡。在过去20年葡萄球菌疾病已急剧增加，这种增加与血管内装置和侵入性操作的伴随并行。由于抗生素抗性的伴随上升，疾病发生率的这种上升更令人不安，因此，对免疫原性组合物有迫切需要，所述免疫原性组合物用于疫苗或者引发多克隆或单克隆抗体以赋予被动免疫作为预防或治疗葡萄球菌感染和相关疾病的方法。

葡萄球菌病是兔的一种常见病，是由金黄色葡萄球菌引起的养兔业常见的一种传染病，可引起各年龄段的兔群发病，养殖场为减少经济损失一般采取抗生素进行治疗，然而长期、大量抗生素的应用，导致细菌耐药性的增强和蔓延，是防治难度不断增加。此外用抗生素治疗容易在肉品种药物残留，影响食品安全。研制和开发有效疫苗，对于该菌感染的预防已成为热点。

现有技术中的疫苗大多数为注射剂和冻干粉剂，体积较大，保存占用空间，并且在保存过程中较易导致疫苗菌株的失效，从而导致保护率降低。

发明内容

本发明的技术方案为：一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，包括以兔葡萄球菌抗原、分散载体、水性打印佐剂混合物作为打印喷涂液，以及以冻干保护粉剂作为铺粉，采用3DP打印技术将打印喷涂液反复喷涂在每层铺粉上，得到三维立体结构的含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物；

兔葡萄球菌抗原为致免疫有效量为10⁹-10¹⁰ CFU/ml的兔葡萄球菌抗原菌种；

打印喷涂液与冻干保护粉剂的用量比为1mg：0.2-0.5ml。

进一步地，兔葡萄球菌抗原菌种的制备方法包括以下步骤：

1)将从感染金黄色葡萄球菌病死兔的肝、肺分离培养的肠道菌和呼吸道菌作为菌种进行复苏，经纯菌检查合格后，分别将两种菌株接种至普通肉汤培养基，置37℃培养18-24h，制成预定浓度的菌液；

2)采用比浊法和紫外分光光度法确定呼吸道菌的浓度为1.0-5.0亿/mL，按菌液量的0.3％加入甲醛溶液，置37℃灭活18-24h；确定肠道菌的浓度为8.0-11亿/mL，先经100℃浴2.5h，后再加0.3％甲醛溶液置37℃灭活18-24h；

3)将步骤2)处理后的肠道菌和呼吸道菌接种于普通琼脂斜面、血琼脂斜面，37℃养24-48h后确证无活菌生长，经免疫用细菌经镜检、无菌试验检定合格后保存于4℃冰箱备用，得到兔葡萄球菌抗原菌种。该兔葡萄球菌抗原菌种分离后可进行繁殖培育，实现批量生产。

进一步地，分散载体为负载有分散蛋白B的壳聚糖纳米微粒，分散蛋白B能够促进生物膜的整体扩散，有利于将兔葡萄球菌抗原菌种分散释放。