[发明专利]含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，其特征在于，包括以兔葡萄球菌抗原、分散载体、水性打印佐剂混合物作为打印喷涂液，以及以冻干保护粉剂作为铺粉，采用3DP打印技术将所述打印喷涂液反复喷涂在每层铺粉上，得到三维立体结构的含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物；

所述兔葡萄球菌抗原为致免疫有效量为10 ⁹ -10 ¹⁰ CFU/ml的兔葡萄球菌抗原菌种；

所述打印喷涂液与所述冻干保护粉剂的用量比为1mg：0.2-0.5ml；

所述分散载体为负载有分散蛋白B的壳聚糖纳米微粒；

所述水性打印佐剂按照重量百分比计包括：0.5-1％透明质酸、16-19％葡萄糖、4-6％促渗肽，余量为体积分数为60-80％的乙醇水溶液；

所述冻干保护粉剂按照重量组份计包括：22％微晶纤维素、16％a-D-吡喃甘露糖、10％原花青素、15％胶原蛋白、9％磷酸氢钠、17％木糖醇、11％大豆磷脂。

2.如权利要求1所述的一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，其特征在于，所述兔葡萄球菌抗原菌种的制备方法包括以下步骤：

1)将从感染金黄色葡萄球菌病死兔的肝、肺分离培养的肠道菌和呼吸道菌作为菌种进行复苏，经纯菌检查合格后，分别将两种菌株接种至普通肉汤培养基，置37℃培养18-24h，制成预定浓度的菌液；

2)采用比浊法和紫外分光光度法确定呼吸道菌的浓度为1.0-5.0亿/mL，按菌液量的0.3％加入甲醛溶液，置37℃灭活18-24h；确定肠道菌的浓度为8.0-11亿/mL，先经100℃水浴2.5h，后再加0.3％甲醛溶液置37℃灭活18-24h；

3)将步骤2)处理后的肠道菌和呼吸道菌接种于普通琼脂斜面、血琼脂斜面，37℃养24-48h后确证无活菌生长，经免疫用细菌经镜检、无菌试验检定合格后保存于4℃冰箱备用，得到兔葡萄球菌抗原菌种。

3.如权利要求1所述的一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物的制备方法包括以下步骤：

S1：按照质量份数计，取1-2份分散载体溶于20-35份PBS溶液中，滴加1wt％SMCC进行活化，磁力搅拌1-2h，然后加入1份所述兔葡萄球菌抗原以及0.2wt％戊二醛，继续磁力搅拌6-12h，氮吹定容至1-5ml，得到负载有兔葡萄球菌抗原的浓缩液；

S2：将所述浓缩液与所述水性打印佐剂按照质量比为1：5-20混合，得到打印喷涂液；

S3：利用CAD软件设计所述组合物最终形状模型，并将药物材料信息输送至计算机设计的模型系统中，再将所述打印喷涂液装入喷涂机构，将所述冻干保护粉剂作为铺粉装入送料机构，利用3DP技术层层铺粉、逐层喷涂打印，得到片剂组合物，最终冷冻干燥、辐射灭菌、包膜封装。

4.如权利要求3所述的一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，其特征在于，步骤S3中所述打印的参数为：每层铺粉厚度为100μm，每层铺粉上单次喷涂打印喷涂液，喷涂直径为5-10mm，铺粉时间间隔为30s，每个所述片剂组合物中冻干保护粉剂与打印喷涂液总量比为1mg：0.2-0.5ml。

5.如权利要求1所述的一种含兔葡萄球菌抗原的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物用于制备预防兔葡萄球菌疫苗，以及利用所述疫苗获取高免血清，为细菌学检测提供有效的血清学鉴别诊断试剂。