[发明专利]一种固定平均聚合度原花青素的制备方法

说明书

本发明提供了一种固定平均聚合度原花青素的制备方法，本发明利用原花青素在蓝莓酒发酵及陈酿过程中发生缩聚反应形成高聚合度原花青素的原理，采用模拟酒体反应环境的方法，选取蓝莓中一种原花青素单体（+）‑儿茶素与乙醛在模拟反应环境下进行缩聚反应，以获得不同平均聚合度的原花青素溶液。该制备方法快速简便，可操作性强，对反应环境、设备条件、操作人员的要求均较低，制备的原花青素溶液具有很强的抗氧化性，可根据实际应用的需要制备不同平均聚合度的原花青素。

技术领域

发明涉及原花青素制备领域，具体涉及一种固定平均聚合度原花青素的制备方法。

背景技术

原花青素（Proanthocyanidins，简称PC）广泛地存在于植物的叶、果实、根及树皮等部位中，是重要的天然多酚类活性物质。蓝莓的原花青素主要存在于蓝莓果实、蓝莓叶中，因其具有良好的强抗氧化功能、清除自由基功效、抗癌功能等，在食品药品及保健产品等许多领域有广阔的应用前景。

原花青素通常衍生于黄烷类化合物，分子骨架为C₆-C₃-C₆，主要包括单体和聚合体。原花青素的单体结构主要有黄烷-3-醇和黄烷-3，4-二醇，当黄烷-3，4-二醇的C-4亲电中心与黄烷-3-醇的C-8位或C-6位亲核中心结合时，即可连接成聚合度为2的原花青素分子，二聚物仍然可继续与黄烷-3，4-二醇结合，生成三聚物。原花青素在果酒发酵和陈酿期间，会发生直接缩合反应，同时，由于酒体内乙醇氧化及发酵过程中生成的乙醛，会诱导原花青素发生间接缩聚反应，不断形成高聚合度的化合物。

蓝莓中主要存在4种黄烷-3-醇：（+）-儿茶素、（-）-表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯，且含量也较高。有研究表明，（+）-儿茶素和（-）-表儿茶素的含量随蓝莓酒发酵时间延长而呈减少的趋势，说明这两种单体在发酵过程中进行了较为稳定的聚合作用。并且，（+）-儿茶素是蓝莓中原花青素的单体代表物，能在模拟酒体溶液中与醛类物质反应，由于聚合反应只涉及黄烷醇的A环，所以（+）-儿茶素是一种很好的模型化合物，可用于等效的原花青素反应，故优选（+）-儿茶素作为反应单体。乙醛是酒体发酵时乙醇氧化而来，可作最适诱导剂，而后在模拟蓝莓酒创造的酸性条件下，发生诱导缩聚反应。反应机理如下：

（+）-儿茶素单体在醛类的诱导下，发生架桥反应，在酸性条件下，醛类物质分子质子化形成C+离子，对（+）-儿茶素分子发起亲核进攻，（+）-儿茶素分子通过 CH₃-CH-键连接，生成(+)-儿茶素二聚化合物。

目前国内外对原花青素按聚合度进行分级分离的研究较多，但聚合度越高，原花青素越难以被分离出来，且分级分离的成本较高、耗时过长、过程复杂，原料的利用率也不高，原花青素结构复杂，聚合体成分繁多，要想获得具体平均聚合度的原花青素非常困难，同时，也会对制备出的原花青素抗氧化功效产生一定的影响。

中国专利108774205公布了一种蓝莓利口酒中原花青素的生物提取方法，取蓝莓利口酒样品，真空浓缩、冷冻干燥后，按每克样品加入5mL的石油醚，间歇浸渍搅拌24h，过滤并收集滤液A，进行除酯，以乙醇为提取溶剂，进行提取，通过离心并收集滤液B；在57℃下真空旋转得浓缩液，利用大孔树脂进行洗脱纯化并收集洗脱液，进一步减压浓缩除去乙醇，最后冷冻干燥得到原花青素提取物。该专利存在以下缺点：真空浓缩会造成一定程度的产品损耗；蓝莓利口酒中成分繁杂，按此发明进行提取纯化后所得产物中，非目标成分的存在可能影响成品的品质。而本发明是模拟蓝莓酒的酒体环境，直接使用乙醛诱导原花青素单体（+）-儿茶素进行缩聚反应，没有其他杂质成分的干扰，温度条件仅需室温即可。