[发明专利]检测NAT1基因分型的引物和方法

说明书

本发明公开了一种检测与5‑氨基水杨酸(5‑aminosalicylic acid,5‑ASA)等药物代谢有关的NAT1(N‑acetyltransferase 1,NAT1)基因突变分型的引物和方法，其包括扩增检测核苷酸序列的3对引物；采用PCR扩增技术和Sanger测序技术。本发明可快速地将NAT1基因突变分型检测出来，并可判断其代谢表型。利用本发明完成的检测结果准确，在抗结核治疗时，可结合患者NAT1基因型的不同或代谢表型实施个体化治疗方案。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测与5-ASA等药物代谢有 关的NAT1基因分型的引物和方法。

背景技术

N-乙酰化是药物在体内进行生物转化的重要代谢途径之一，不同个体间存在 快、慢型乙酰化代谢的差异。根据编码基因的不同可将N-乙酰基转移酶分为 NAT1和NAT2两型，两者均发现具有遗传多态性(genetic polymorphism)，可引 起相应代谢酶含量或酶活性的改变，从而影响个体的药物代谢能力。

5-ASA是治疗炎症性肠病的主要药物，该药在进入结肠粘膜内后，经结肠粘 膜上皮细胞和炎细胞中的Ⅱ相代谢酶NAT1代谢，形成无抗炎作用的N-乙酰化 5-ASA，结肠粘膜局部的5-ASA浓度直接决定临床疗效，而NAT1介导的乙酰 化代谢速率的快慢可能是决定5-ASA疗效的关键环节之一。因此，根据NAT1 的代谢速度的不同将NAT1分为不同的表型.建立检测NAT1表型的方法有助于 判断药物疗效并减少药物不良反应。

目前研究表明，NAT1基因至少有26种点突变，这些NAT1基因点突变的 发生率或分布频率存在种族差异。我国人群中主要的基因型包括NAT1*3， NAT1*4，NAT1*10和NAT1*11四种。目前多数观点认为NAT1*4为野生型，代 表正常代谢活性，NAT1*10和NAT1*11表现为快乙酰化代谢活性，而其他突变 型则为慢代谢活性。

结合患者NAT1基因型的不同或代谢表型实施个体化治疗方案，可提高治疗 效果，减少药物不良反应并提高患者依从性。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测NAT1基因突变分型的引物，采用PCR技术， 可用于快速检测炎症性肠病患者NAT1基因分型并判断患者的代谢表型。所述检 测NAT1基因突变分型的PCR扩增引物和测序引物均为：

NAT1-1-F：GTACCACGGATACTATACACTCT

NAT1-1-R：AAGATGATTGACCTGGAGAC

NAT1-2-F：CCTTTGAGAACCTTAACATCC

NAT1-2-R：CCCACCAAACAGTGAACC

NAT1-3-F：AGACATCTCCATCATCTGTGT

NAT1-3-R：ATTTACTCATCTACCAATAAAACT

检测NAT1基因突变分型的方法，包括以下步骤：

(1)抽提外周血中的基因组DNA；

(2)以步骤1中提取的DNA为模板进行PCR扩增；

(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；

(4)将测序结果与标准序列进行比对，确定NAT1的基因分型及代谢表型。 其中步骤2中的PCR扩增引物和步骤3中的测序引物的碱基序列均为：

NAT1-1-F：GTACCACGGATACTATACACTCT

NAT1-1-R：AAGATGATTGACCTGGAGAC

NAT1-2-F：CCTTTGAGAACCTTAACATCC