[发明专利]一种检测隐色素基因CRY1启动子甲基化的引物及方法

说明书

本发明公开了一种检测隐色素基因CRY1启动子甲基化的引物及方法，涉及生物工程技术领域，该引物包括与发生甲基化的模板匹配的甲基化上游引物MF和甲基化下游引物MR，与未发生甲基化的模板匹配的非甲基化上游引物UF和非甲基化下游引物UR，该引物具有灵敏度高、特异性好等优点，实现了CRY1基因启动子甲基化的准确检测；同时，检测结果对于急性髓系白血病预后相关性研究具有重要意义与价值。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别是指一种检测隐色素基因CRY1启动子甲基化的引物及方法。

背景技术

肿瘤是严重危害人类健康的疾病，死亡率较高且近年来增长速度较快，世界卫生组织统计显示每年新诊断出的肿瘤病例已超过1400万人，且多数肿瘤患者的预后情况并不理想。目前导致肿瘤预后较差的原因是肿瘤发生的生物学机制复杂，存在个体差异性，因此，探寻高灵敏度的特异性生物学指标，早期评估肿瘤的预后情况，从而改善预后，对提高肿瘤患者生存率至关重要。

急性髓系白血病(AML)是累计造血干细胞的一种异质性克隆血液学恶性肿瘤，是成人急性白血病中最常见的类型。其特征为以髓样祖细胞增殖不受控制以及抑制成熟血细胞分化的能力而导致造血功能不全。多数AML患者存在难治、复发及预后较差等情况，老年患者平均生存期不足1年，年轻患者中约50％平均生存期可达到5年。因此，进一步探索AML疾病机制，探寻新的治疗方法及促进预后是凾待解决的问题。AML发病机制复杂，近年来，分子生物学的研究证实AML的发展与白血病细胞的基因异常和表观遗传学改变有关，二者是决定治疗效果和预后的重要因素。表观遗传学指非DNA序列改变导致基因表达水平的异常。DNA甲基化是最常见和研究最多的表观遗传改变现象之一，DNA甲基化通过调控基因表达从而导致疾病的发生。近年来多项研究表明遗传生物标志物为评估预后和预测AML患者的治疗效果提供了有用的信息。因此，寻找新的基因表观遗传学改变可能有助于鉴别AML预后情况以及优化治疗策略。

CRY1属于隐色素/光修复酶蛋白家族，是光修复酶的同源物。隐色素基因编码一种黄素蛋白，包括CRY1与CRY2，是调控昼夜节律的振荡器中的核心组件。隐色素与生物钟蛋白(period，PER1-3)共同对驱动振荡器的生物钟基因反馈环起负调控作用。隐色素在调控昼夜节律中起重要作用，昼夜节律的紊乱与很多疾病包括肿瘤的发生密切相关，隐色素基因可控制细胞代谢、增殖、分化、凋亡以及DNA损伤应激等。CRY1的高表达与乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、白血病等恶性肿瘤的发生、发展相关，与多种肿瘤的预后不良也密切相关。CRY1高表达的患者较低表达的患者无进展生存期(PFS)显著缩短，CLL低危患者CRY1基因启动子区高甲基化而诱导转录沉默，同时CLL高危患者和正常人CRY1基因启动子呈现低甲基化状态。但目前尚无CRY1与急性髓系白血病的预后相关性研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种检测隐色素基因CRY1启动子甲基化的引物及方法，用于克服上述现有技术中的全部或者部分不足。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种检测隐色素基因CRY1启动子甲基化的引物，其特征在于，该引物包括与发生甲基化的模板匹配的甲基化上游引物MF和甲基化下游引物MR，与未发生甲基化的模板匹配的非甲基化上游引物UF和非甲基化下游引物UR，所述甲基化上游引物MF：5′-TATTATTGGTTTTTGAAGGAAATCG-3′，甲基化下游引物MR:5′-CTACGTTCCAAAAAATAAAAAAACG-3′；其中，下划线标注的是和发生了甲基化的DNA相匹配的位点。