[发明专利]一种低敏性ω-5-醇溶蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种低敏性ω‑5‑醇溶蛋白及其制备方法和应用，该制备方法包括：将纯化的ω‑5‑醇溶蛋白溶解在三氟甲磺酸中，冰上孵育，期间不时震荡，以获得第一混合液；向所述第一混合液中加入指示剂，并且逐滴加入吡啶溶液，边滴边震荡至所述第一混合液的颜色呈蓝色，以获得第二混合液；将所述第二混合液通过凝胶过滤层析进行脱盐处理，收集洗脱液，冷冻干燥，以获得所述低敏性ω‑5‑醇溶蛋白。本发明制得的低敏性ω‑5‑醇溶蛋白的致敏性降低，能抑制或阻断小麦过敏信息传递，可以作为开发治疗小麦依赖‑运动诱发过敏反应的药物的基础。

技术领域

本发明涉及蛋白质的技术领域，具体涉及一种低敏性ω-5-醇溶蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

小麦作为八大类常见的过敏食物之一，能够引起严重的过敏反应，小麦过敏已成为全球性的食品安全问题。常见的小麦过敏反应有过敏性皮炎、鼻炎、“面包师”哮喘、乳糜泻、麻风皮肤病、运动诱发过敏反应等。

醇溶蛋白是小麦麸质的主要组成成分，占总贮藏蛋白质的40％至50％。醇溶蛋白主要以单体存在，基于在低pH酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳或者十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率分为四类：ω-5-醇溶蛋白、ω-1,2-醇溶蛋白、α-β-醇溶蛋白和γ-醇溶蛋白，且分子量为约30kDa至75kDa。ω-5-醇溶蛋白是小麦依赖-运动诱发的过敏反应(WDEIA)的主要过敏原，会引起皮肤粘膜系统、呼吸系统、心血管系统、消化系统和神经系统损伤，对患者的日常生活造成严重的影响。

目前，针对小麦依赖-运动诱发的过敏反应(WDEIA)主要是通过避免进食小麦类食物、进食后不运动或是通过酶处理降低麦粉致敏性，从而起到防止病发的作用。但其效果不佳。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种低敏性ω-5-醇溶蛋白的制备方法。该制备方法使得ω-5-醇溶蛋白的致敏性降低，且能抑制小麦过敏信息传递。

本发明的第二个目的在于提供一种低敏性ω-5-醇溶蛋白。

本发明的第三个目的在于提供一种低敏性ω-5-醇溶蛋白的应用。

为此，在本发明的一方面，本发明提出了一种低敏性ω-5-醇溶蛋白的制备方法，包括以下步骤：

(1)将纯化的ω-5-醇溶蛋白溶解在三氟甲磺酸中，冰上孵育，期间不时震荡，以获得第一混合液；

(2)向所述第一混合液中加入指示剂，并且逐滴加入吡啶溶液，边滴边震荡至所述第一混合液的颜色呈蓝色，以获得第二混合液；

(3)将所述第二混合液通过凝胶过滤层析进行脱盐处理，收集洗脱液，冷冻干燥，以获得所述低敏性ω-5-醇溶蛋白。

由此，通过三氟甲磺酸和吡啶对ω-5-醇溶蛋白的N末端糖基进行切除从而获得低敏性ω-5-醇溶蛋白，使低敏性ω-5-醇溶蛋白的致敏性降低，并且使得低敏性ω-5-醇溶蛋白能够抑制天然蛋白与特异性IgE(血清免疫球蛋白E)的结合、诱导Treg(调节T)细胞分化，从而起到主动抑制或阻断小麦过敏信息传递的作用，可以作为开发治疗小麦依赖-运动诱发过敏反应的药物的基础。

另外，根据本发明上述实施例提出的一种低敏性ω-5-醇溶蛋白的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，在所述步骤(1)中，冰上孵育的时间为15～30min。

根据本发明的实施例，在所述步骤(1)中，纯化的ω-5-醇溶蛋白通过以下步骤制得：

取小麦原料粉碎，以获得小麦粉；

在所述小麦粉中加入超纯水超声震荡15min，离心，以获得第一沉淀；

向所述第一沉淀中加入1mol/L的氯化钠超声震荡10～15min，离心，以获得第二沉淀；