[发明专利]一种用于肺肾阴虚证中药组合物的检测方法

权利要求书

1.一种用于肺肾阴虚证的中药组合物的检测方法，中药组合物包括百部、白及、冬虫夏草、甘草和菠菜子，其特征在于包括对冬虫夏草和甘草的定性鉴别：

所述冬虫夏草的定性鉴别采用显微鉴别，包括如下步骤：

（1）取用于肺肾阴虚证的中药组合物0.05-2.0重量份，置于试管中，加蒸馏水0.5-10体积份，超声处理1-5 min，制备成供试品溶液；

另取不含冬虫夏草的阴性样品0.05-2.0重量份，同法制备对照品溶液；

（2）分别取供试品溶液和阴性对照品溶液0.1-0.8体积份进行涂片；

（3）显微镜检供试品溶液涂片和阴性样品溶液涂片，供试品溶液涂片上可见带有小刺毛的黄棕色体壁碎片、团状虫草菌丝或灰棕色子座细胞，阴性对照品溶液涂片上未见上述显微结构；

所述甘草的定性鉴别采用薄层色谱法鉴别，包括如下步骤：

（1）取用于肺肾阴虚证的中药组合物0.05-0.4重量份，置于具塞三角瓶中，加50-90%的甲醇5-30体积份，超声处理5-30min，滤过，水浴蒸干，用0.2-2.0体积份的甲醇溶解，制备成供试品溶液；

另取甘草对照药材0.01-2.0重量份，同法制备成甘草对照品溶液；

按用于肺肾阴虚证的中药组合物中各药材比例及制备工艺配制不含甘草的阴性样品，取0.05-2.0重量份不含甘草的阴性样品，同法制成不含甘草的阴性对照品溶液；

（2）取步骤（1）得到的三种溶液各0.001-0.02体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上；

（3）以正丁醇-乙酸乙酯-水的体积比为4:1:5的上层溶液为展开剂，将薄层板放置在展开缸中展开，取出晾干，喷以5-20%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置日光下和紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点，阴性无干扰。

2.如权利要求1所述的用于肺肾阴虚证的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括测定中药组合物中总生物碱的含量，包括如下步骤：

（1）取用于肺肾阴虚证的中药组合物制备供试品溶液，同时制备对叶百部碱对照品溶液；

（2）采用紫外分光光度法，磷酸盐缓冲液和溴百里香酚蓝试液为显色剂，检测波长为412nm，进行测定，即得。

3.如权利要求2所述的用于肺肾阴虚证的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括测定中药组合物中总生物碱的含量，包括如下步骤：

（1）精密称取用于肺肾阴虚证的中药组合物0.5-5.0重量份于具塞三角瓶中，加甲醇10-50体积份，超声处理15-60min，滤过，滤液定容至10-50体积份，制备成供试品溶液；

精密称取对叶百部碱对照品0.002-0.08重量份于10-50体积份的容量瓶中，加甲醇定容至刻线，摇匀，制备成对叶百部碱对照品溶液；

（2）精密吸取供试品溶液0.2-3.0体积份于分液漏斗中，加入pH3.6-8.5的磷酸盐缓冲液1-10体积份和溴百里香酚蓝试液1-8体积份，摇匀，用氯仿萃取1-5次，每次1-20体积份，取下层液置于10-50体积份的容量瓶中，用氯仿定容至刻线，摇匀，以甲醇为空白，于412nm处测定，即得。

4.如权利要求3所述的用于肺肾阴虚证的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括测定中药组合物中腺苷的含量，包括如下步骤：

（1）采用高效液相色谱法检测腺苷含量，色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为5-30:95-70的乙腈-水为流动相进行等度洗脱；流速为0.5-2.0mL/min；柱温为15-40℃；检测波长为210-400nm；理论塔板数按腺苷峰计算应不低于4000；

（2）取用于肺肾阴虚证的中药组合物用甲醇提取，制备成供试品溶液，同时制备腺苷对照品溶液和不含冬虫夏草的阴性对照品溶液；

（3）分别精密吸取供试品溶液、腺苷对照品溶液和不含冬虫夏草的阴性对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得；

每1g用于肺肾阴虚证的中药组合物含冬虫夏草以腺苷计，不得少于0.03mg。