[发明专利]靶向人源化EGFRvIII的嵌合抗原受体及其用途在审
| 申请号： | 201910501680.8 | 申请日： | 2019-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN112063641A | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 王恩秀;汪晨;张海 | 申请（专利权）人： | 南京艾德免疫治疗研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C07K19/00;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 王新生 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市浦口区江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 人源化 egfrviii 嵌合 抗原 受体 及其 用途 | ||
【说明书】：
本发明涉及一种靶向人源化EGFRVIII的嵌合抗原受体及其用途。具体而言，本发明提供一种核酸序列，选自：含有依次连接的人DAP12的编码序列、T2A的编码序列、人源化EGFRVIII单链抗体的编码序列、人TREM1跨膜和胞内区的编码序列。本发明还提供相关的融合蛋白、含所述编码序列的载体，以及所述融合蛋白、编码序列、载体的用途。
技术领域
本发明属于嵌合抗原受体领域，具体涉及靶向EGFRvIII的嵌合抗原受体及其用途。
背景技术
EGFR是分子量为170kD的具有TK(酪氨酸激酶)活性的跨膜糖蛋白,由胞外区、跨膜区和胞内区组成,EGFR借助胞外区与配体(表皮生长因子、转化生长因子-α、双调节素等)结合后发生同源或异源二聚化,导致细胞质中酪氨酸残基自体磷酸化,引发细胞内信号传导,从而对核内基因表达和细胞生长分化产生调节作用。
近年研究发现,在肿瘤的发生和发展过程中,EGFR蛋白的表达不是很稳定,常常出现基因的扩增和重排,导致基因突变使得肿瘤细胞表面的抗原表型发生调变。其中最常见的突变部位为胞外配体结合位点,产生的突变类型为EGFRvIII,与EGFR完整结构比较,26个外显子中第2-7个外显子被删除,导致801个碱基对缺失,其删除端由一个新的甘氨酸密码子(GGT)连接,翻译成蛋白质后,胞外区6-273氨基酸被一个甘氨酸残基替代。丧失了胞外配体结合部位的EGFRvIII可在没有配体结合的情况下组成性激活酪氨酸激酶,产生自体磷酸化,诱发下游的信号转导途径,引起级联反应,影响肿瘤细胞的生物学行为。
随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一[Schmitz M，et al.Chimeric antigen receptor-engineered T cellsforimmunotherapy of Cancer.J Biomed Biotechnol，2010，doi：10.1155/2010/956304.]。嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，CAR能针对所选择的免疫细胞重定向其特异性和反应性，因此赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较与正常T细胞受体(TCR)应答不同，不受MHC限制，具有活化和增殖的能力，因此具有高效的杀伤肿瘤细胞的能力。
嵌合抗原受体(CAR)在T细胞上表达合成蛋白，其将抗体的抗原识别片段(如抗体单链可变区片段)与胞内信号结构域融合。研究发现，以肿瘤特异性单克隆抗体的单链可变区(scFv)取代TCR的α，β链可变区，并将scFv直接和T细胞信号传导结构域连接，形成嵌合抗原受体(CAR)表达于T细胞表面，可通过scFv识别肿瘤特异性抗原，直接产生T细胞的活化信号，促进T细胞活化、增殖，特异性杀伤肿瘤细胞。该过程主要依赖CAR-T细胞表面的scFv对肿瘤抗原的特异性识别，免疫反应的特异性和杀伤性较强。
本发明对构建的靶向EGFRVIII的新型CAR，本发明采用的是人源化EGFRVIII(huER2.1)单链抗体，huER2.1具有高亲和力。huER2.1是靶向EGFRVIII的人源化形式的单克隆抗体，对肿瘤具有治疗和诊断作用。本发明对CAR-T细胞进行了修饰，针对EGFRVIII靶点发挥CAR-T细胞抗肿瘤作用。本发明为临床实验和临床治疗奠定良好的基础。
随着CAR-T细胞治疗经验的积累和不断完善，其在恶性肿瘤中的应用越来越受到各界关注。在此环境下，我们要加快步伐，利用自身已有的工作基础、研发团队、医疗团队申请开展临床试验，推动CAR-T细胞治疗在治疗恶性肿瘤的道路上快速前进。
发明内容
本发明第一方面提供一种核酸序列，所述核酸序列选自：
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- 促干细胞外泌体分泌的改造基因及与prp复合组合物及应用-202310738730.0
- 孙庆丰 - 中科细胞再生康复医疗（山东）有限公司
- 2023-06-21 - 2023-09-19 - C12N15/62
- 本发明提供了一种促干细胞外泌体分泌的改造基因，核苷酸序列为SEQ ID NO：1。一种改造干细胞外泌体与prp复合组合物，包括改造干细胞的外泌体与富血小板血浆prp以1:1的比例混合。以及改造干细胞外泌体与prp复合组合物在修复皮肤损伤制剂中的应用。本发明提供了一种增加干细胞外泌体分泌产量的改造基因“EF1a‑STEAP3‑SDC4”干细胞的设计与构建方法。与野生型相比，改造干细胞具有更高的外泌体分泌能力，可产生更多的外泌体，打破外泌体产量化的局限性，显著降低干细胞外泌体的生产成本。外泌体与富血小板血浆组合后可修复损伤的皮肤，修复效果好且可控制成本，使此类制剂的售价降低，具有较大的应用范围。
- 分泌TRAIL的工程化巨噬细胞及其应用-202210464925.6
- 尹秀山;黄馨;邓博天;史滨河;刘军花;周慧;单晓娇;房晓彬 - 鲲石生物科技（深圳）有限公司
- 2022-04-29 - 2023-09-19 - C12N15/62
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及涉及分泌TRAIL的工程化巨噬细胞及其在抗肿瘤中的应用。本发明构建了修饰巨噬细胞的融合基因、载体、工程化巨噬细胞及其应用。构建了TRAIL‑cM、Tri‑TRAIL‑cM和Arg1‑trimTRAIL‑cM三种质粒，被该质粒转染的巨噬细胞能够表达并外泌具有穿膜功能的TRAIL‑TAT蛋白通过发挥巨噬细胞的分泌功能，并结合巨噬细胞的肿瘤趋化性和浸润性，将药物蛋白递送到实体瘤内部，达到肿瘤治疗的作用。
- 经优化的新冠病毒嵌合核酸疫苗及其用途-202210514372.0
- 高福;陆剑;王奇慧;杜沛;吴鑫凯;陈茜;戴连攀 - 中国科学院微生物研究所;北京大学
- 2022-05-12 - 2023-09-19 - C12N15/62
- 本发明提供了多核苷酸、其相关产品及其在制备新冠疫苗中的用途；其中，一种多核苷酸为编码新冠病毒Delta变异株与Beta变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子，另一种多核苷酸为编码新冠病毒Delta变异株与Omicron变异株S蛋白RBD结构域的重组嵌合抗原肽的、经序列优化的DNA分子或mRNA分子；这些多核苷酸均可在体内高水平地表达相应的重组嵌合抗原肽，基于所述多核苷酸的嵌合核酸疫苗针对多种新冠病毒毒株均可提供较强的免疫保护效力，并且在与其他类型疫苗进行序贯免疫时可诱导针对新冠病毒各型毒株的(即，广谱的)、显著增高的免疫反应水平。
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