[发明专利]一种维拉卡肽的合成方法

说明书

本发明涉及一种维拉卡肽的制备方法，其包括以下步骤：1)以固相合成的方法制备全保护的维拉卡肽主链‑固相合成树脂；2)裂解脱除Cys的侧链保护基P；3)固相电化学法氧化，通过二硫键偶联半胱氨酸；4)裂解所有保护基以及固相合成树脂，得到维拉卡肽粗肽；任选地，5)色谱纯化，得到维拉卡肽精肽；其中，固相电化学氧化方法为，将步骤2)所得脱除Cys的侧链保护基的多肽‑固相合成树脂在电解质和溶液中电解至二硫键反应完全；P为Cys的侧链保护基。此方法能够提高片段肽树脂的利用率，提高主链片段利用率和原子利用率，从而降低生产成本，避免了原研专利中2,2‑二硫二吡啶化合物的使用，更加环保，倡导了绿色化学的理念。

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种维拉卡肽的合成方法。

背景技术

维拉卡肽(Etelcalcetide)是由AMGEN INC开发的一种拟钙剂，主要用于慢性肾病成人患者做血液透析治疗的继发性甲状旁腺功能亢进的多肽药物。2017年2月07日在美国上市，商品名为Parsabiv。其用于继发性甲状旁腺机能亢进时在降低甲状旁腺素水平方面与西那卡塞一样好，并且因其可在血液透析后静脉给药，优于现有的标准拟钙剂治疗药西那卡塞。

维拉卡肽的主链有七个D-型氨基酸组成，侧链通过一个二硫键与L-半胱氨酸相连。其肽序如下：

维拉卡肽肽序

常规方法偶联合成维拉卡肽的关键在于二硫键的构建，常规的肽合成中使用的构建二硫键的方法包括空气氧化法，碘/醋酸体系氧化法，双氧水氧化法，这类方法无法保证反应的专一选择性，无可避免的会产生错配杂质，产品纯度较低，增加了纯化的难度。专利CN105504012介绍了一种假稀释反应避免液相反应中存在的多肽链间二硫键错配问题，但固相成二硫键反应为非均相反应，反应转化率较低，导致产品维拉卡肽收率低于30％。专利CN106928320和专利CN201580029560.2报道了2,2-二硫二吡啶活化法合成维拉卡肽的方法，但产生等当量的巯基吡啶化合物，不但增加纯化难度，而且给环境造成污染，不利于环保。专利CN106928321介绍了一种全液相合成维拉卡肽的方法，但反应后处理操作繁杂，总收率较低。

开发原子经济性反应和环保已成为绿色化学研究的核心内容，从原子经济性的角度来讲，常规的依序偶联方法由于无法避免这种线性肽的二硫键的构建的专一选择性问题，导致最后一个L-型半胱氨酸二硫键的构建时，七个D-氨基酸主链片段有效利用率较低，即原子利用率较低。在一般的固相合成操作过程中，氨基酸用量一般为3～5eqv，当主链片段有效利用率较低时将造成相应氨基酸的大量浪费，而且D-氨基酸价格较昂贵，更有必要提高原子利用率，从而降低生产成本，减少能源浪费。而采用2,2-二硫二吡啶活化法合成维拉卡肽又会导致大量的巯基吡啶副产物生成，造成环境污染，不利于环保。

发明内容

鉴于上述情况，亟需一种环保高效的维拉卡肽制备方法，本发明通过Fmoc/tBu策略固相连接主链氨基酸残基，然后通过电化学方法固相偶联侧链半胱氨酸，最后裂解沉淀得到维拉卡肽。如此，可以避免反应的专一选择性问题，提高主链片段利用率，提高原子利用率，从而降低生产成本，避免了2,2-二硫二吡啶化合物的使用，更加环保，符合绿色化学的理念。反应流程如下：

本发明一个方面提供了一种维拉卡肽的制备方法，其包括以下步骤：

1)以固相合成的方法制备全保护的维拉卡肽主链-固相合成树脂，即Ac-D-Cys(P)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-固相合成树脂；

2)裂解脱除Cys的侧链保护基P；

3)固相电化学法氧化，通过二硫键偶联半胱氨酸；

4)裂解所有保护基以及固相合成树脂，得到维拉卡肽粗肽；