[发明专利]一种维拉卡肽的合成方法

权利要求书

1.一种维拉卡肽的制备方法，其包括以下步骤：

1)以固相合成的方法制备全保护的维拉卡肽主链-固相合成树脂，即Ac-D-Cys(P)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-固相合成树脂；

2)裂解脱除Cys的侧链保护基P；

3)固相电化学法氧化，通过二硫键偶联半胱氨酸；

4)裂解所有保护基以及固相合成树脂，得到维拉卡肽粗肽；

任选地，5)色谱纯化，得到维拉卡肽精肽；

其中，固相电化学氧化方法为，将步骤2)所得脱除Cys的侧链保护基的多肽-固相合成树脂在电解质和溶液中电解至二硫键反应完全；

P为Cys的侧链保护基。

2.根据权利要求1所述的制备方法，Cys的侧链保护基选自Trt、Mmt和Dpm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，步骤3)中的电化学反应温度为25℃-65℃。

4.根据权利要求3所述的制备方法，步骤3)中的电化学反应温度为40-60℃。

5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤3)中的电解质选自四丁基高氯酸铵、四丁基四氟硼化铵、四丁基六氟膦化铵。

6.根据权利要求5所述的制备方法，步骤3)中的电解质选自四丁基四氟硼化铵。

7.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤3)中的采用铂电极通电氧化，电流强度为5-20mA。

8.根据权利要求7所述的制备方法，步骤3)中电流强度为10-15mA。

9.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤1)中固相合成的方法制备指按照C端到N端的顺序偶联Fmoc-AA-OH，Fmoc-AA-OH的偶联顺序为依次偶联Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-Cys(P)-OH，然后偶联乙酸。

10.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，所述固相合成的方法包括：a)脱除Fmoc，接着用溶剂洗涤树脂，直至用检测方法检测到完全脱除Fmoc为止；b)将待偶联氨基酸或乙酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；c)重复a)和b)。

11.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤2)所用到的脱除剂为TFA/DCM的混合液，溶液体积比为1％-10％，反应终点为溶液由红色变为无色。

12.根据权利要求11所述的制备方法，步骤2)所用到的脱除剂TFA和DCM溶液体积比为1％-5％。

13.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤4)中裂解液为TFA，TIS和H₂O的混合物。

14.根据权利要求13所述的制备方法，步骤4)中裂解液为TFA，TIS和H₂O的混合物，其比例为TFA:TIS:H₂O＝95:2.5:2.5。

15.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，步骤5)所述纯化步骤采用反相高压液相色谱法。

16.根据权利要求15所述的制备方法，所述反相高压液相色谱法包括：以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1％三氟乙酸水溶液/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。