[发明专利]评价缩水甘油及其酯体内暴露的血红蛋白加合物检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种评价缩水甘油及其酯体内暴露的血红蛋白加合物检测方法，包括制备血红蛋白干粉，将血红蛋白粉进行衍生及净化；设定色谱条件进行等度洗脱；设定质谱条件进行质谱定量检测；利用上述液相‑质谱联用方法，通过标准曲线法对样品进行定量分析。本发明采用了同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法(UHPLC‑MS/MS)，对缩水甘油的血红蛋白加合物进行定量，分析时间大大缩短，同时使得Gly‑Val‑PTH空间异构体得到较好的分离，实现同步检测，这能够更加全面的对缩水甘油的内暴露量进行评估。

技术领域

本发明涉及一种评价膳食缩水甘油及其酯中长期体内暴露的血红蛋白加合物同步检测方法及其应用，属于食品安全领域。

背景技术

德国风险评估研究所于2009年对婴幼儿乳粉和食用油中缩水甘油酯污染进行了评估(假定缩水甘油酯在体内100％转化为缩水甘油)，基于缩水甘油的遗传毒性和致癌性的BMDL10，婴幼儿摄入乳粉中缩水甘油酯的暴露边界(Margin of Exposure，MOE)比为670，健康风险极高。仅关注3-氯-1,2-丙二醇(3-monochloropropane-1,2-diol；3-MCPD)或氯丙醇酯污染及暴露将会低估该类化合物的健康风险，因此，各类氯丙醇酯以及缩水甘油酯在食品中的污染也应引起关注。Appel等对大鼠的研究表明，缩水甘油棕榈酸酯在大鼠体内，主要是在胃肠道中快速水解为缩水甘油，并分布到各组织中；与对照的缩水甘油组相比，由缩水甘油酯水解出的缩水甘油与血红蛋白结合的速度仅稍慢而已；两组中，缩水甘油与血红蛋白的结合量及从尿中排出的巯基尿酸的量均是相当的(Appel K E,Abraham K,Bergerpreiss E,et al.Relative oral bioavailability of glycidol from glycidylfatty acid esters in rats.[J].Archives of Toxicology,

2013,87(9):1649-1659.)。该研究表明，缩水甘油酯在动物体内是迅速转化为缩水甘油发挥毒性作用的。国际癌症研究机构(IARC)将缩水甘油列为2A类致癌物(对人类很可能有致癌性)。

德国油脂协会(DGF)2011年发布了同步测定油脂中3-MCPD酯和缩水甘油酯的方法，该方法目前被广泛接受。Garballo-Rubio等人通过GC-MS-MS方法检测鱼油中的3-MCPD酯及缩水甘油酯建立同步检测方法(Garballo-Rubio A,Soto-Chinchilla J,Moreno A,etal.A novel method for the determination of glycidyl and 3-monochloropropanediol esters in fish oil by gas chromatography tandem massspectrometry[J].Talanta,2017,165:267-273.)。通过液相色谱-质谱联用法(如LC-MS，LC-MS/MS，LC-TOF/MS等)分析样品中的待测物质，不通过衍生的方法，直接测定缩水甘油酯，无需对样品进行水解，只需要对油脂样品进行简单处理，如均质，溶剂溶解稀释等，然后直接进样。Blumhorst等人通过LC-MS方法直接测定植物油中的7种缩水甘油酯(BlumhorstM R,Venkitasubramanian P,Collison M W.Direct Determination of Glycidyl Estersof Fatty Acids in Vegetable Oils by LC–MS[J].Journal of the American OilChemists Society,2011,88(9):1275-1283.)。