[发明专利]一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，所述小鼠模型为PSMD11基因杂合敲除的小鼠，其特征在于，包括步骤如下：

构建PSMD11基因条件性敲除的重组载体；线性化上述重组载体并转染胚胎干细胞；筛选发生同源重组的胚胎干细胞克隆；将上述筛选出的胚胎干细胞克隆显微注入C57BL/6供体小鼠的囊胚；将含有胚胎干细胞克隆的囊胚移植到假孕小鼠的子宫，生产出嵌合体小鼠；将上述嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠回交生出杂合子小鼠；将上述杂合子小鼠与全身性表达Cre酶的小鼠交配，获得PSMD11基因条件性敲除小鼠模型。

2.如权利要求1所述的一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述PSMD11基因条件性敲除的重组载体的构建方法，步骤如下：

(1)提取含有PSMD11基因的细菌人工染色体；

(2)以步骤(1)提取到的细菌人工染色体为模板，PCR扩增三段同源重组前段，分别为长臂、短臂、及条件性敲除区，PCR的引物序列分别为：

长臂的PCR引物为LA-F：5’-GGACTAGTCAATGGCTCACCACTGTCAG-3’和LA-R：5’-CGGGATCCGAGGAGAGGGAAGAGGGAGG-3’，

短臂的PCR引物为SA-F：5’-ACGCGTCGACAGGAACGTGAGTTACAGACG-3’和SA-R：5’-GGAATTCCAGGAGAGCTACACAGAGAAA-3’，

条件性敲除区的PCR引物为cKO-F：5’-CGGGATCCTCTCGCAACATTGTCTTATTC-3’和cKO-R：5’-GCTCTAGAGAGTATCCAACACCCTCACA-3’，

其中，下划线为引入的酶切位点；

(3)将步骤(2)扩增得到的三段同源重组片段序贯插入质粒载体中，即得PSMD11基因条件性敲除的重组载体。

3.如权利要求2所述的一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述细菌人工染色体为RP23-307G3和RP23-276J12。

4.如权利要求2所述的一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增的反应体系为：细菌人工染色体模板2μL，TaqDNA聚合酶25μL，上游引物(10μM)1μL，下游引物(10μM)1μL，ddH₂O21μL，共50μL；

PCR扩增的反应条件：94℃预变性5min；94℃变性20s，60℃退火20s，72℃延伸3min，共30个循环；72℃保温10min。

5.如权利要求2所述的一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述序贯插入质粒载体的方法为：采用一段同源重组片段的酶切位点对同源重组片段和质粒载体分别进行双酶切后连接，连接成功后，采用下一段同源重组片段对应的酶切位点对该同源重组片段和链接成功后的质粒载体分别进行双酶切和连接，以此类推，完成三段同源重组片段的序贯插入。

6.如权利要求1所述的一种PSMD11基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述的胚胎干细胞为C57BL/6来源的胚胎干细胞。

7.按照权利1所述的构建方法构建得到的PSMD11基因条件性敲除小鼠模型作为PSMD11基因功能研究的模型鼠的用途。