[发明专利]一种重组基因工程菌及其发酵产香兰素的应用

权利要求书

1.一种重组基因工程菌，其特征在于所述重组基因工程菌Escherichia coli JH1是由耐受香兰素和阿魏酸的基因导入宿主菌构建而成，所述耐受香兰素和阿魏酸的基因由周质膜融合蛋白AcrA基因、内膜转运蛋白AcrB基因和外膜蛋白TolC基因组成，核苷酸序列为SEQID NO.1所示；所述宿主菌构建方法为：将ech基因和fcs基因导入表达载体pTrc99a构建重组载体PegYB，转入受体菌E.coli BW25113中，挑选阳性克隆，获得重组受体菌E.coliBW25113::PegYB；所述重组基因工程菌Escherichia coli JH1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月1日，保藏编号为：CCTCC NO：M 2019222，保藏地址为：中国武汉武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述重组基因工程菌在发酵生产香兰素中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为：将重组基因工程菌接种至发酵培养基，以阿魏酸为底物，再加入IPTG至终浓度0.2mM，37℃培养48小时，得到含香兰素的发酵液，发酵液离心，取上清液分离纯化获得香兰素；所述发酵培养基为2YT培养基。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于阿魏酸添加终浓度为1-5g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述重组基因工程菌在接种前先进行活化和扩大培养，再将种子液以体积浓度1％的接种量，接种至LB液体培养基：

活化培养：将重组基因工程菌接种于含有100μg/mL氨苄霉素和25μg/mL氯霉素的LB固体培养基，37℃培养过夜，获得活化菌株；

种子培养：将活化菌株接种至LB液体培养基中，37℃培养过夜，获得种子液；LB液体培养基配方为：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L，溶剂为水，pH自然；LB固体培养基是在LB液体培养基中添加质量浓度2％琼脂。