[发明专利]一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法

权利要求书

1.一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。

S2，将S1中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。

S3，将S1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。

S4，用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入S3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。

S5，将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码。瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。

2.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，所述培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚，配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，避免出现差错。

3.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，所述配制植物生长素时，先按要求浓度称好药品，置于小烧杯或容量瓶中，用1～2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。配制细胞分裂素时，应先用少量0.5或1N的盐酸溶解，然后加蒸馏水至所需量，以上各种所述混合液(母液)或单独配制药品，均放入冰箱中保存，以免变质、长霉，至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。

4.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，为了避免每次配制的所述培养基都要对几十种化学药品进行称量，应将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。

5.根据权利要求1所述的一种黑老虎直接坯体发生和植株再生的培养基及方法，其特征在于，所述培养基配制完毕后，进行立即灭菌，培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内，在汽相120℃条件下，灭菌20分钟，也能够采用间歇灭菌法进行灭菌，即将培养基煮沸10分钟，24小时后再煮沸20分钟，如此连续灭菌三次，即可达到完全灭菌的目的，经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在4～5℃低温下保存要更好些，含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月。在多数情况下，应在消毒后两周内用完。