[发明专利]用于乳腺癌的试剂体系和试剂盒及其应用

说明书

本申请属于医学检验技术领域，具体涉及一种用于乳腺癌的试剂体系和试剂盒及其应用。提供的试剂盒包括用于BCRA2、Foxp3和CXCR‑6扩增的特异性引物，荧光定量PCR反应液及标准品。应用所述的试剂盒能快速检测相关基因的表达，为乳腺癌的诊断提供依据；该试剂盒的使用方法简单，检测的特异性高，采样方便，便于推广。

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种用于乳腺癌的试剂体系和试剂盒及其应用。

背景技术

全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势，近年我国乳腺癌发病率的增长速度高出高发国家1～2个百分点。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率(粗率)全国合计为42.55/10万，城市为51.91/10万，农村为23.12/10万。乳腺癌已成为当前社会的重大公共卫生问题。自20世纪90年代全球乳腺癌死亡率呈现出下降趋势；究其原因，一是乳腺癌筛查工作的开展，使早期病例的比例增加；二是乳腺癌综合治疗的开展，提高了疗效。

临床中，乳腺癌的筛查多采用影像学，但是射线一般存在辐射，对人体会产生一定的不良影响。从基因层面进行乳腺癌诊断的研究也在不断涌现，已经公开的乳腺乳腺癌易感基因有BRCA1、BCRA2、TP53、PTEN、ATM和CHEK2等。中国专利CN101608225A公开了一种乳腺癌遗传检测试剂盒，检测雌激素受体α基因、儿茶酚氧位甲基转移酶基因COMT、谷胱甘肽硫转移酶P1基因GSTP1、人乳腺癌易感基因1BRCA1、人乳腺癌易感基因2BCRA2上的单核苷酸多态性，通过基因型评估个体乳腺癌遗传风险。

中国专利CN108624697A公开了一种乳腺癌21基因检测试剂盒及检测方法，该试剂盒中含有21种基因检测用的试剂，每种基因需设计两组特异性引物和两条特异性探针，总体测试数量大，且各种被测基因之间可能存在相互影响，得到的检测结果不可靠。此外，该法需要先获取乳腺癌样本的RNA，经逆转录得到cDNA后，再通过QPCR反应检测，确定Ct值，判断患病风险。

发明内容

本申请需要解决的现有技术问题在于，现有的用于乳腺癌检测的方法局限于遗传性检测，或者需要同时检测非常多的基因，操作复杂，成本高。

本申请的研究目的在于，寻找能够特异性标志乳腺癌患病情况的基因，即BCRA2、Foxp3和CXCR-6，通过对这三种基因的检测，就能快速判断被测个人患乳腺癌的风险，简单、快速。

具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：

一方面，本申请提供了一种用于乳腺癌的试剂体系，所述的用于乳腺癌的试剂体系包括特异性引物和荧光定量PCR反应液；其中，特异性引物包括：

用于BCRA2扩增的引物序列1和引物序列2，引物序列1为：5’-tctccatttcccgcct-3’，引物序列2为：5’-cttactgtgaggatgg-3’；

用于Foxp3扩增的引物序列3和引物序列4，引物序列3为：5’-tttcttctcggtataaaa-3’,引物序列4为：5’-agggcccctgaccccccc-3’；

用于CXCR-6扩增的引物序列5和引物序列6，引物序列5为：5’-aatgaagggagt-3’,引物序列6为：5’-gaacatttttta-3’。

优选地，所述荧光定量PCR反应液的组成包括：Green Ⅰ、Taq DNA聚合酶、dNTP和缓冲液；其中，Taq DNA聚合酶的浓度为2.5U/μL，dNTP的浓度为2-5mM。

优选地，所述缓冲液的组成包括：100-120mM Tris-HCl、120-150mM氯化钾、10-15mM氯化镁、3-5mM甘油和1-3mM甜菜碱。