[发明专利]一种提高铜绿假单胞菌检测准确性方法在审
| 申请号： | 201910355893.4 | 申请日： | 2019-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN110106265A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 谢小保;文霞;张淑瑶;张志聪 | 申请（专利权）人： | 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/385 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510070 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 铜绿假单胞菌 细菌 检测 检出 繁殖能力 实时荧光定量PCR 平板培养基 传统平板 细菌DNA 后提取 总DNA 叠氮 扩增 溴化 配制 受损 | ||
1.一种提高铜绿假单胞菌检测准确性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
配制样品备检溶液、向样品备检溶液中加入叠氮溴化丙锭进行反应，反应完毕后提取细菌总DNA，再用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌是针对铜绿假单胞菌oprL基因进行实时荧光PCR检测。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的向样品备检溶液中加入叠氮溴化丙锭进行反应为加入叠氮溴化丙锭的终浓度为5.0～15.0mg/L，混匀后25℃避光反应15min，取出置于冰上，500～750W的卤素灯照射15min，光照距离为20～30cm；光照反应结束后，收集菌体。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的样品备检溶液是按每取10g化妆品样品加入10g灭菌吐温-80和80mL灭菌生理盐水，震荡混匀，制成1:10的样品备检溶液。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的针对铜绿假单胞菌oprL基因进行实时荧光PCR检测，其在实时荧光PCR检测中的引物对为：
oprL-F：5’-AGCAGCCACTCCAAAGAAACC-3’；
oprL-R：5’-CCAGAGCTTCGTCAGCCTTG-3’。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的实时荧光PCR检测的反应体系包括：premix Ex Taq 10μL，10μmol/L的上、下游引物各0.3μL，50×Dye0.4μL，DNA模板1μL，ddH2O8μL。
7.根据权利要求2或6所述的方法，其特征在于，所述的实时荧光PCR检测的反应程序为：94℃30s，94℃5s，60℃30s，40个循环，于60℃进行荧光信号检测。
8.一种检测铜绿假单胞菌的检测引物对，其特征在于，包括：
oprL-F：5’-AGCAGCCACTCCAAAGAAACC-3’；
oprL-R：5’-CCAGAGCTTCGTCAGCCTTG-3’。
9.一种检测检测铜绿假单胞菌的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求8所述的检测铜绿假单胞菌的检测引物对。
10.权利要求1-8所述的方法在化妆品中铜绿假单胞菌检验中的应用。
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