[发明专利]抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体以及应用

说明书

本发明公开一种抗广谱或多价HPV‑L1、E6/E7‑IgY及其小分子抗体和制备方法、组合物及应用。本发明采用基因重组技术制备预防性抗广谱HPV‑L1‑IgY和治疗性抗广谱或多价HPV‑E6/E7‑IgY及其小分子抗体，并将这种抗广谱或多价HPV小分子抗体长效化修饰以及偶联脂质体和细胞穿膜肽。本发明还提供一种抗广谱或多价HPV‑IgY及其小分子抗体和组合物制成的液晶微囊、凝胶、栓剂、乳膏剂、洗液、片剂、泡腾片、胶囊剂、软胶囊及注射剂，在防治人乳头瘤病毒(HPV)感染的药物、消毒产品、保健品和医疗器械中的应用，可解决预防绝大多数型号HPV感染和治疗受HPV感染之阳性患者使其“阳转阴”的难题。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地说，涉及一种抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体、组合物及制备法和应用。

背景技术

宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的疾病，全球每2分钟有一人死于宫颈癌。现代医学已证明子宫颈癌源自一种人乳头瘤病毒(HPV)感染，比例高达80％的绝大多数妇女，在50岁之前都会被HPV感染，世界卫生组织的统计数字表明，全球被感染总数约达到6.3亿人之多，占人口总数10％。根据2003-2004年来自美国的国家健康和营养研究课题的一个调查结果显示，世界各国14-59岁的HPV总感染率为高达26.8％；由此可见，HPV感染给全球女性造成的危害远超之前的估计。

国际上目前已经有预防性的二价、四价和九价疫苗分别可以预防2种、4种和9种型号的人乳头瘤病毒(HPV)感染。但是，人乳头瘤病毒(HPV)有100多种型号，不同的型别引起不同的临床表现，不同国家和地区流行的人乳头瘤病毒(HPV)也不同。采用简单地增加疫苗靶抗原种类来达到完全预防各地不同的人乳头瘤病毒(HPV)感染的目的，是根本做不到的。另外，对于HPV感染后期的阳性患者，由于HPV病毒HPV病毒DNA整合到宿主细胞DNA，衣壳蛋白L1和L2表达缺失；造成以L1、L2为靶抗原的疫苗和治疗药物都失效。同时，致癌基因蛋白E6/E7过度表达，致癌作用强化，造成细胞无限增殖，宫颈组织由病变阶段恶性转化为癌症。

因此，研究开发一种对绝大多数型号的HPV感染都有预防作用的新药以及能使绝大多数型号的HPV感染后期的阳性患者“阳转阴”的新药，是关系到全球亿万女性健康和生命的大事，也是摆在国际医学科学界面前的一项重要课题，并且有着十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体、组合物以及制备方法和应用，以解决预防和治疗绝大多数型号的人乳头瘤病毒(HPV)感染，阻止癌变的难题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：构造一种抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体，所述抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体由如下方法制备得到：

A、制备广谱抗原，所述广谱抗原包括预防性广谱HPV-L1/L2抗原和治疗性广谱或多价HPV-E6/E7抗原，所述预防性广谱HPV-L1/L2抗原包括融合蛋白病毒样颗粒抗原、HPV31-L2偶联KLH多肽抗原、HPV16-L2或HPV18-L2偶联KLH多肽抗原、L1/L2嵌合体假病毒VLP抗原、高危型HPV L1蛋白共同抗原合成表位多肽抗原；所述治疗性广谱或多价HPV-E6/E7抗原包括E6/E7融合基因真核表达蛋白抗原、E6/E7融合基因重组病毒抗原、E6/E7蛋白共同抗原合成表位多肽抗原；所述预防性广谱HPV-L1/L2抗原和治疗性广谱或多价HPV-E6/E7抗原还包括优选组合方式制作涵盖15种高危型HPV病毒的多价抗原。

B、制备免疫蛋：每隔两周对产蛋鸡注射一次上述步骤制得的广谱抗原，注射3次，第一次免疫20天后，分别检取产蛋鸡所产免疫蛋，并进行编码标记，得到抗广谱人乳头瘤病毒-IgY免疫蛋；

C、制备抗广谱HPV-L1、E6/E7--IgY粗提物；

D、制备抗广谱HPV-L1、E6/E7--IgY纯品溶液；