[发明专利]抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体以及应用

权利要求书

1.一种抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体，其特征在于，所述抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7-IgY及其小分子抗体由如下方法制备得到：

A、制备广谱或多价抗原，所述广谱抗原包括预防性广谱HPV-L1/L2抗原和治疗性广谱或多价HPV-E6/E7抗原，所述预防性广谱HPV-L1/L2抗原包括融合蛋白病毒样颗粒抗原、HPV31-L2偶联KLH多肽抗原、HPV16-L2或HPV18-L2偶联KLH多肽抗原、L1/L2嵌合体假病毒VLP抗原、高危型HPVL1蛋白共同抗原合成表位多肽抗原；所述治疗性广谱或多价HPV-E6/E7抗原包括E6/E7融合基因真核表达蛋白抗原、E6/E7融合基因重组病毒抗原、E6/E7蛋白共同抗原合成表位多肽抗原；所述预防性广谱HPV-L1/L2抗原和治疗性广谱或多价HPV-E6/E7抗原还包括优选组合方式制作涵盖15种高危型HPV病毒的多价抗原；

B、制备免疫蛋：每隔两周对产蛋鸡注射一次上述步骤制得的广谱抗原，注射3次，第一次免疫20天后，分别检取产蛋鸡所产免疫蛋，并进行编码标记，得到抗广谱HPV-L1、E6/E7-IgY免疫蛋；

C、制备抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7-IgY粗提物；

D、制备抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7-IgY纯品溶液或干粉；

E、制备抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab：将抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7-IgY纯品溶液调节pH至3.0-5.0，加入催化蛋白质酶；充分搅拌溶解，产生酶促反应，然后低温高速旋转离心，弃去沉淀得上清液，对上清液进行超滤，得到浓缩液；再将超滤后所获浓缩液进行凝胶层析，将层析收集物透析浓缩，得到抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab。

2.根据权利要求1所述的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体，其特征在于，步骤E制备得到的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab还利用聚乙二醇、右旋糖苷或聚氨基酸长效化修饰，得到长效化的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab，其中，利用聚乙二醇长效化修饰的工艺条件如下：

调节硼酸缓冲液pH值至6.5-10.0，在抗广谱HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab中加入调节pH后的硼酸缓冲液，使抗广谱HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab的浓度为0.1-0.5mg/mL，加入聚乙二醇进行反应，且抗广谱人乳头瘤病毒小分子抗体Fab与聚乙二醇的摩尔比的比值为1/10～1/30，反应温度为15℃～30℃，反应时间控制在1h～3h。

3.根据权利要求1所述的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体，其特征在于，步骤E得到的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab通过被加入超微粉碎机中碾磨粉碎，制得纳米化的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab，再通过如下方法包裹上脂质体包裹材料以制成脂质体液晶微囊或纳米脂质体干粉：

把卵磷脂和胆固醇溶于乙醚中，再分别将纳米化的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab加入4mmol/L的PBS配成抗体溶液，将抗体溶液与卵磷脂和胆固醇乙醚溶液混合充分搅拌均匀，超声处理2min；在水浴中减压旋转蒸发至呈凝胶状，漩涡振荡使凝胶转相，再继续蒸发除尽乙醚；再通过分离方法除去未包入的抗体，沉淀用水洗二次，离心，得沉淀，用10mmol/L PBS稀释，即制得抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab纳米脂质体液晶微囊；将所制得的抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab纳米脂质体液晶微囊干燥制得抗广谱或多价HPV-L1、E6/E7小分子抗体Fab纳米脂质体干粉。