[发明专利]定量检测核酸的方法及表面等离子共振生物传感器

说明书

本公开涉及一种定量检测核酸的方法及表面等离子共振生物传感器。本公开的无标样定量检测核酸的方法基于表面等离子共振原理和分析物的扩散性与分析物绝对浓度之间的关系，实现了特异性定量检测核酸，克服了传统实时荧光定量PCR方法的耗时长、费用高、不能绝对定量且不可再生、不能实时监控的缺点，具有灵敏度高、特异性强、无需标记及可绝对定量等优点。整个样品分析过程包括结合、平衡/解离、再生三个过程，其中芯片的再生即分析物离开芯片表面探针的过程，该过程中芯片表面探针活性和结构不受影响，因此可实现传感器的重复利用。

技术领域

本发明属于生物技术产品分析测试领域，具体涉及一种定量检测核酸的方法及表面等离子共振生物传感器。

背景技术

核酸测量方法的准确度(包括正确度和精密度)是现代分析化学和分子生物学研究面临的重要挑战之一。建立核酸含量的准确测量方法，实现核酸定量结果的准确和溯源是生物分析研究的重点之一。

目前，核酸定量检测主要包括两种方法：一种是实时荧光定量PCR(Real-timePCR)方法，该方法反应时间较长、实验程序复杂、且需要利用标准品制作实验用标准曲线；另一种则是数字PCR(ddPCR)方法，该方法虽为无需制作标准曲线的绝对定量方法，但实验成本较高，而且反应中所需的试剂、耗材均为一次性使用，不可再生。

发明内容

本公开的目的是提供一种既能实现无需标准曲线的绝对定量，又可再生的生物传感器及定量检测核酸的方法。

为了实现上述目的，本公开第一方面提供一种定量检测核酸的方法，该方法包括如下步骤：

S1，根据目标核酸的基因序列选取与所述目标核酸互补的单链DNA备选探针；

S2，将所述备选探针以第一偶联量偶联于表面等离子共振生物传感器的传感芯片表面；

S3，将含有已知浓度的所述目标核酸的溶液流经所述传感芯片并检测RU值响应信号，根据所述RU值响应信号计算得到质量控制参数QC_ratio；

S4，当QC_ratio不满足可靠性条件时，

改变所述备选探针的第一偶联量后再次进行步骤S3，并再次验证得到的QC_ratio是否满足所述可靠性条件；和/或

重新选取与所述目标核酸互补的单链DNA备选探针后再次进行步骤S2和S3，并再次验证得到的QC_ratio是否满足所述可靠性条件；

其中，所述第一偶联量为800～1200RU；

所述可靠性条件包括：QCratio≥0.2；

S5，重复步骤S4直至QC_ratio满足所述可靠性条件；

S6，当QC_ratio满足所述可靠性条件时，所述备选探针作为检测探针以第二偶联量偶联于所述传感芯片表面；将含有待测物的待测液流经所述传感芯片并检测待测液的RU值响应信号；若未产生RU值响应信号，则所述待测物中不含有所述目标核酸；若产生RU值响应信号，则所述待测物中含有所述目标核酸，根据所述待测液的RU值响应信号计算得到所述待测液中的所述目标核酸的浓度，其中，所述第二偶联量为1400～2000RU。

可选地，所述传感芯片表面结合有链霉亲和素；所述备选探针的5’端标记有生物素，所述备选探针的长度为23～30bp。

可选地，所述偶联包括如下步骤：将含有所述备选探针的偶联溶液流经所述芯片，使所述备选探针与所述芯片表面结合，得到所述表面等离子共振生物传感器。