[发明专利]定量检测核酸的方法及表面等离子共振生物传感器

权利要求书

1.一种定量检测核酸的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1，根据目标核酸的基因序列选取与所述目标核酸互补的单链DNA备选探针；

S2，将所述备选探针以第一偶联量偶联于表面等离子共振生物传感器的传感芯片表面；

S3，将含有已知浓度的所述目标核酸的溶液流经所述传感芯片并检测RU值响应信号，根据所述RU值响应信号计算得到质量控制参数QC_ratio；

S4，当QC_ratio不满足可靠性条件时，

改变所述备选探针的第一偶联量后再次进行步骤S3，并再次验证得到的QC_ratio是否满足所述可靠性条件；和/或

重新选取与所述目标核酸互补的单链DNA备选探针后再次进行步骤S2和S3，并再次验证得到的QC_ratio是否满足所述可靠性条件；

其中，所述第一偶联量为800～1200RU；

所述可靠性条件包括：QC_ratio≥0.2；

S5，重复步骤S4直至QC_ratio满足所述可靠性条件；

S6，当QC_ratio满足所述可靠性条件时，所述备选探针作为检测探针以第二偶联量偶联于所述传感芯片表面；将含有待测物的待测液流经所述传感芯片并检测待测液的RU值响应信号；若未产生RU值响应信号，则所述待测物中不含有所述目标核酸；若产生RU值响应信号，则所述待测物中含有所述目标核酸，根据所述待测液的RU值响应信号计算得到所述待测液中的所述目标核酸的浓度，其中，所述第二偶联量为1400～2000RU。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述传感芯片表面结合有链霉亲和素；所述备选探针的5’端标记有生物素，所述备选探针的长度为23～30bp。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述偶联包括如下步骤：将含有所述备选探针的偶联溶液流经所述芯片，使所述备选探针与所述芯片表面结合，得到所述表面等离子共振生物传感器。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述偶联溶液还含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20；所述备选探针在所述偶联溶液中的浓度为20～100nM，所述偶联溶液流经所述传感芯片的流速为5～10uL/min。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法包括：步骤S4中，首先改变所述备选探针的所述第一偶联量后再次进行步骤S3，并再次验证得到的QC_ratio是否满足所述可靠性条件，其中所述第一偶联量在800～1200RU的范围内改变；

当在800～1200RU内的偶联量无法使QC_ratio满足所述可靠性条件时，重新选取与所述目标核酸互补的单链DNA备选探针后再次进行步骤S2和S3，并再次验证得到的QC_ratio是否满足所述可靠性条件。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S6中，所述待测液流经所述传感芯片的流速为2～100μL/min，时间为120～180s；所述待测液还含有浓度为10～13mM的HEPES、浓度为130～150mM的NaCl、浓度为3～5mM的EDTA和浓度为0.05～0.1体积％的Surfactant P20，所述待测液的pH为7.4～8.0。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法还包括：在步骤S6之后，将所述传感芯片再生。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述再生的方法包括：使再生试剂与所述传感芯片接触30s～60s进行再生处理；所述再生试剂为质量浓度为0.05％SDS溶液和/或浓度为30～40mM的NaOH溶液。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述目标核酸为农癌杆菌终止子基因；所述检测探针的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

10.一种用于定量检测核酸的表面等离子共振生物传感器，其特征在于，所述传感器为权利要求1～9中任意一项所述的表面等离子共振生物传感器。