[发明专利]一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法

说明书

本发明公开了一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法。该方法包括以下两个内容：(1)提取目标大气环境样品中的DNA，以此获取的DNA为模板，用本发明设计的正向引物和反向引物对(SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2)提取的DNA样品为模板，利用定量PCR扩增技术获得目的基因的PCR产物；(2)运用步骤(1)中得到的PCR扩增循环数，依据定量PCR测定目的基因sulI质粒标准品的标准曲线，得到目标大气环境样品中磺胺类耐药基因sulI的含量。本发明提供的目的基因引物序列和方法可以对大气环境样品中磺胺类耐药基因sulI进行快速精确定量。

技术领域

本发明涉及环境生物学领域，具体涉及一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法。

背景技术

抗生素是指由细菌、霉菌或其他一些微生物产生的次级代谢产品或者人工合成的类似物，现已发展成为世界上使用范围最广泛、剂量最大的药物之一。近年来，抗生素的滥用造成耐药细菌和耐药基因的环境污染问题，已引起全球的高度关注。

有别于一般的环境污染物，抗生素耐药基因主要以质粒作为携带载体，并由特定基因编码的蛋白通道在相同甚至不同种属的细菌之间发生基因水平扩散。研究发现抗生素耐药基因能从肠道耐药细菌向土著敏感菌传播，不仅改变土著菌环境的微生物菌落结构，而且能够在环境中长期残留，对环境安全构成潜在危害，甚至经食物链将抗生素耐药基因向人体内传播，对人类健康构成潜在危害。目前大量研究发现耐药基因在地表水环境和土壤等生态环境中广泛存在，而且含量很高。但是，对雾霾天气的PM_2.5和PM₁₀样品中耐药菌，尤其是耐药基因研究较少。大气环境中，尤其是雾霾天气的高浓度PM_2.5和PM₁₀环境中耐药细菌和耐药基因的含量相对较少，但耐药细菌和耐药基因能通过空气传播进入人体呼吸系统，产生严重的公共健康风险。

磺胺类耐药基因作为在环境介质中被广泛检测到的基因类型，目前主要采用可培养微生物的方法研究耐药性，但是这些方法对不可培养微生物的耐药基因无法进行检测。

定量PCR技术是指通过设计目标基因引物，根据标准曲线对目标基因进行定量分析的方法。该方法可以同时检测环境中的不可培养微生物所携带的耐药基因，尤其对大气环境这种微生物含量相对较低的细菌中耐药基因的检测具有较好的技术优势。因此运用定量PCR技术定量研究大气环境中耐药基因的含量特征，对深入研究大气环境中耐药基因对人类公共健康的环境风险具有重要理论意义。

发明内容

本发明目的是解决大气环境中对不可培养微生物的耐药基因无法进行检测的问题，提供了一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法，能对大气环境中磺胺类耐药基因sulI进行快速精确定量。

本发明的技术方案

一种检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的引物序列，包括正向引物和反向引物，其碱基序列为：

正向引物：CACCGGAAACATCGCTGCA；

反向引物：AAGTTCCGCCGCAAGGCT。

通过以上设计的已知引物序列检测大气环境中磺胺类耐药基因sulI的方法，具体包括：

(1)提取目标大气环境样品中的DNA，以此提取的DNA为模板，利用以上设计的正向引物和反向引物对此DNA进行定量PCR扩增，并记录达到荧光阈值时的循环数；

(2)运用步骤(1)中得到的循环数，根据定量PCR测定目的基因sulI质粒标准品的标准曲线，得到目标大气环境样品中磺胺类耐药基因sulI的含量。