[发明专利]一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物、试剂盒及方法，属于生物化学与分子生物学领域。该PCR引物为：xmc‑F CAAGTTTCTGCCCTATCATGC，xmc‑R TAAGTTTCAGTCTTGCGACCA。检测试剂盒包括PCR引物，并用于快速检测结肠小袋纤毛虫。检测方法包括：(1)提取待检样品的DNA；(2)PCR反应体系建立；(3)对待检样品进行PCR反应检测；(4)对PCR扩增产物进行电泳及测序。本发明的方法可实时监测反应，快速检测，具有特异性强等优点，为简便、快速地检测结肠小袋纤毛虫带来便利。

技术领域

本发明属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物、试剂盒及方法。

背景技术

结肠小袋纤毛虫是引起痢疾的重要原因，特别是在免疫系统受损的人群中，结肠小袋纤毛虫可能成为一种重要的病原体。结肠小袋纤毛虫(balantidium coli)寄生于宿主结肠，感染引起结肠小袋纤毛虫病，呈世界性分布，主要流行于热带和亚热带地区。目前已知包括人在内的多种动物如猪、猩猩、猴、大鼠、豚鼠、马、牛、羊、鸵鸟、鹰等均可感染，感染的范围从无症状、轻微腹泻到血粪和暴发性痢疾。

自1857年Malmsten首次在两名痢疾病人的粪便中发现以来，该病已给人和动物的健康带来了严重的影响，同时也造成了巨大的经济损失。比如食蟹猴等动物被结肠小袋纤毛虫感染，不仅给养殖业带来经济损失，还严重影响动物质量和动物跟踪研究检测结果的准确性，同时威胁动物饲养人员、兽医工作者及相关密切接触人群身体健康，因此快速准确地检测出结肠小袋纤毛虫感染情况，及时控制清除病原，保持动物的清洁，具有重要的公共卫生意义和研究意义。

目前用于实验动物结肠小袋纤毛虫的检测还是采用粪便涂片或沉淀染色法等传统检测手段，这些方法虽然要求设备仪器不高，但由于虫体体积较小，常常受杂质影响较大，显微镜检查时检出率较低；染色法需要配制试剂种类多，步骤繁琐，要求显微镜操作者非常熟悉各类原虫及卵囊形态，具有超强辨别能力和较好的视力，否则受人为因素影响较大。对于大批量的样品检测，需要大量的人力物力，特别是显微镜观察者眼睛极易疲劳，难以在短时间内完成大量检测样品的工作。特别是结肠小袋纤毛虫滋养体在离体粪便样品中处于外界极端环境条件下或染液中极易死亡、变形、甚至溶解，严重影响检测结果的准确度，曾在实验中出现过采样当天采用粪便直接涂片检测发现大量结肠小袋纤毛虫滋养体，第二天重复检测样品却一个都没发现的情况。结肠小袋纤毛虫滋养体这一脆弱性，促使样品检测工作者必须在采样当天拿到样品并检测完成，如远途送样不能及时或样品数量过多拖延至第二天，则难以确保结果的准确性，极有可能造成假阴性，造成阳性动物在群体中隐性传染，导致严重损失，可见在涂片或沉淀染色法等传统检测手段中对样品保存条件十分苛刻。因此利用现代分子生物学知识和仪器设备研究开发新的快速检测结肠小袋纤毛虫方法，制定出操作规程或标准，非常迫切。而PCR方法具有灵敏性高、特异性好、反应时间短及不受样本保存条件影响等优势，可在早期预防控制疾病扩散中发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物、试剂盒及方法。本发明提供一种PCR引物，并构建试剂盒，能够快速、实时检测，为基层提供更为简便、快捷、准确地检测结肠小袋纤毛虫的方法。

本发明通过以下技术方案来实现：

一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物，包括以下PCR引物：

xmc-F CAAGTTTCTGCCCTATCATGC

xmc-R TAAGTTTCAGTCTTGCGACCA。

本发明的检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物扩增片段为18S rRNA，扩增长度为730bp。

本发明的检测结肠小袋纤毛虫的试剂盒，包括上述的PCR引物。

一种检测结肠小袋纤毛虫的非疾病诊断目的的方法，采用上述的PCR引物检测结肠小袋纤毛虫。