[发明专利]一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201910285849.0 | 申请日： | 2019-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN110079625A | 公开（公告）日： | 2019-08-02 |
| 发明（设计）人： | 谢永平;贺会利;庞彬辉;李军;潘艳 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6893 | 分类号： | C12Q1/6893;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南宁启创知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 45122 | 代理人： | 谢美萱 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 结肠小袋纤毛虫 快速检测 试剂盒 种检测 检测 分子生物学领域 生物化学 电泳 待检样品 检测试剂 实时监测 特异性强 测序 便利 | ||
1.一种检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物，其特征在于，包括以下PCR引物：
xmc-F CAAGTTTCTGCCCTATCATGC
xmc-R TAAGTTTCAGTCTTGCGACCA。
2.根据权利要求1所述的检测结肠小袋纤毛虫的PCR引物，其特征在于，所述PCR引物扩增片段为18S rRNA，扩增长度为730bp。
3.一种检测结肠小袋纤毛虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的PCR引物。
4.一种检测结肠小袋纤毛虫的非疾病诊断目的的方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求1-3任一所述的PCR引物检测结肠小袋纤毛虫。
5.根据权利要求4所述的检测结肠小袋纤毛虫的非疾病诊断目的的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待检样品的DNA；
(2)PCR反应体系建立：以每25μl体积的PCR反应体系为计，
(3)对待检样品进行PCR反应检测；
(4)对PCR扩增产物进行电泳及测序。
6.根据权利要求5所述的检测结肠小袋纤毛虫的非疾病诊断目的的方法，其特征在于，所述PCR反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性45s，59-68℃退火1min，72℃延伸1min；如此循环35次后，72℃再延伸10min。
7.根据权利要求6所述的检测结肠小袋纤毛虫的非疾病诊断目的的方法，其特征在于，所述PCR反应的最佳退火温度为63-65℃。
8.根据权利要求5所述的检测结肠小袋纤毛虫的非疾病诊断目的的方法，其特征在于，将PCR扩增产物在1.5％的琼脂糖凝胶上进行电泳，然后将有目的条带的PCR扩增产物进行胶回收、克隆和测序，准确后进行提取质粒。
9.一种如权利要求1-3任一所述的PCR引物在制备检测结肠小袋纤毛虫的试剂盒中的运用。
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