[发明专利]基于外周血的肺癌早筛用的试剂盒在审
| 申请号： | 201910267716.0 | 申请日： | 2017-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN110452981A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 张晓妮;刘园园;温媛 | 申请（专利权）人： | 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 44398 深圳舍穆专利代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 黄贤炬<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 518000广东省深圳市南山区高*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肺结节 外周血样本 捕获探针 发夹序列 间接影响 结合序列 索引序列 通用引物 试剂盒 肺癌 增殖 分化 细胞 高灵敏度 疾病筛查 接头结合 区域捕获 基因 外周血 探针 无创 引物 血浆 诊断 | ||
1.一种基于外周血的肺癌早筛用的试剂盒，其特征在于，
包括：
接头，其包括Tag序列、Poly N序列、第一发夹序列、第二发夹序列、第一索引序列、第一通用引物结合序列、第二通用引物结合序列和dUTP，所述第一索引序列用于区分不同外周血样本；
PCR引物，其是针对肺结节相关且间接影响着细胞的增殖分化的358个基因而设计的引物，所述PCR引物用于与所述接头结合；以及
捕获探针，其是针对肺结节相关且间接影响着细胞的增殖分化的358个基因而设计的探针，所述捕获探针用于所述外周血样本中的血浆的cfDNA的区域捕获。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
所述Tag序列为ACTG，所述Poly N序列为NNNNNNNNNNNN，所述第一发夹序列为AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC，所述第二发夹序列为ATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT，所述第一索引序列为XXXXXXXX，所述第一通用引物结合序列为TAGAGCATACGGCAGAAGACGAAC，所述第二通用引物结合序列为AATGATACGGCGACCACCGAG。
3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：
所述接头包含核苷酸序列：5’-P-ACTGNNNNNNNNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXXXXTAGAGCATACGGCAGAAGACGAACUAATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
在所述接头中，所述第一发夹序列与所述第二发夹序列形成发夹结构。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
所述Poly N序列为随机碱基序列，并且所述第一索引序列为8bp的随机序列。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
所述PCR引物包括针对EGFR基因L858R位点设计的正向引物和反向引物，所述正向引物序列为SEQ ID NO:2，所述反向引物序列为SEQ ID NO:3。
7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
所述捕获探针包括针对EGFR基因18号外显子设计的上游探针和下游探针，所述上游探针的序列为SEQ ID NO:4，所述下游探针的序列为SEQ ID NO:5。
8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
还包括经链霉亲和素处理的磁珠，并且所述捕获探针的3’端具有生物素标记。
9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：
所述358个基因包括：与肺癌细胞增殖分化相关的驱动基因、抑制肺癌细胞生长增殖的抑癌基因、肺癌信号通路相关基因，肺部其他肿瘤相关基因，以及与良性肿瘤相关的基因。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：
所述358个基因包括：35个与肺癌细胞增殖分化相关的驱动基因、41个抑制肺癌细胞生长增殖的抑癌基因、89个肺癌信号通路相关基因，124个肺部其他肿瘤相关基因，以及69个与良性肿瘤相关的基因。
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