[发明专利]一种用于辅助诊断结核性胸膜炎的实时荧光定量PCR试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201910233687.6 | 申请日： | 2019-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN109913544B | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 付锦;张辰宇;陈熹;李智慧;王毅飞;周祯;付正 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨;马鑫 |
| 地址： | 150081 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 辅助 诊断 结核 胸膜炎 实时 荧光 定量 pcr 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种作为辅助诊断结核性胸膜炎的生物标志物，其特征在于，所述的生物标志物为结核杆菌特异性小RNA片段，包括Mtb-ms-1和Mtb-ms-2，其中Mtb-ms-1的序列如SEQ IDNO.1所示，Mtb-ms-2的序列如SEQ ID NO.2所示。
2.用于检测权利要求1中所述的生物标志物的引物对和探针组合。
3.如权利要求2所述的引物对和探针组合，其特征在于，用于检测Mtb-ms-1的引物对序列如SEQ ID NO.3和4所示，探针序列如SEQ ID NO.5所示；用于检测Mtb-ms-2的引物对序列如SEQ ID NO.6和7所示，探针序列如SEQ ID NO.8所示。
4.权利要求2或3所述的引物对和探针组合在制备辅助诊断结核性胸膜炎的试剂中的应用。
5.一种用于辅助诊断结核性胸膜炎的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有用于检测权利要求1中所述的生物标志物的引物对和探针组合，所述的生物标志物为结核杆菌特异性小RNA片段，包括Mtb-ms-1和Mtb-ms-2，其中Mtb-ms-1的序列如SEQID NO.1所示，Mtb-ms-2的序列如SEQ ID NO.2所示。
6.如权利要求5所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，用于检测Mtb-ms-1的引物对序列如SEQ ID NO.3和4所示，探针序列如SEQ ID NO.5所示；用于检测Mtb-ms-2的引物对序列如SEQ ID NO.6和7所示，探针序列如SEQ ID NO.8所示。
7.如权利要求5或6所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，用于结核性胸膜炎的辅助诊断时，实时荧光定量PCR检测的体系为20μl，包括：ddH2O 14.5μl，PCR缓冲液2μl，25mmol/l MgCl2 1.2μl，10mmol/LdNTP 0.4μl，耐热DNA聚合酶Taq 0.3μl，用于检测所述的生物标志物的引物对0.4μl，探针0.2μl，cDNA模板1μl；
实时荧光定量PCR检测条件为：95℃5min，再95℃15s后60℃1min进行40个循环，读取Ct值。
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