[发明专利]一种牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法

权利要求书

1.一种牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法，其特征在于，所述的牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法，包括以下步骤：

步骤一，采用全程低蛋白和限制饮食结合方法建立IUGR模型；

步骤二，IUGR胎鼠IGF2/H19印迹控制区组蛋白修饰测试；

步骤三，利用原位杂交检测IUGR胎鼠脑组织神经干细胞因子mRNA的表达；

所述步骤一中低蛋白和限制饮食结合方法建立IUGR模型，具体包括以下步骤：

(1)准备大鼠低蛋白饲料、牛磺酸饲料、标准饲料；

(2)暗室条件下将雌雄大鼠以5:2合笼，第二天早晨取阴道分泌物镜检，以发现精子确定为妊娠第1天即；

(3)将孕鼠随机分为对照组、IUGR组及IUGR+孕鼠补充牛磺酸组，每组10只；

(4)IUGR组孕鼠自受孕之日到分娩当天正常组给予大鼠标准饲料，IUGR组和牛磺酸组给予低蛋白饲料且仅给予对照组饮食的25～35％的量喂养，牛磺酸组自妊娠第10天起饲料中添加牛磺酸饲料直至自然分娩。

2.如权利要求1所述的牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法，其特征在于，所述步骤一中整个饲养过程中采用灌胃饲养，自由饮水，室内温度25℃±2℃，湿度65％～85％，12h明暗交替光照。

3.如权利要求1所述的牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法，其特征在于，所述步骤一中低蛋白饲料，按照能量比例由蛋白质6％、碳水化合物75％、脂肪19％组成。

4.如权利要求1所述的牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法，其特征在于，所述步骤二中IUGR大鼠IGF2/H19印迹控制区组蛋白修饰测试方法如下：

(1)采用妊娠期持续低蛋白和限制饮食的方法模拟宫内营养不良环境，至出生后减少限制饮食组每窝仔鼠数量为8只，正常对照组每组为8只，以构建宫内发育迟缓及生后追赶生长的大鼠模型；

(2)提取RNA，采用Real time PCR检测目的基因IGF2基因mRNA的相对表达水平；

(3)利用组织进行染色质免疫共沉淀处理后，采用Real time PCR进行基因表达的定量分析，检测0d、8w对照组及IUGR组IGF2/H19印迹控制区CTCF1、CTCF2、CTCF3和CTCF4组蛋白修饰的变化。

5.如权利要求1所述的牛磺酸对IUGR胎鼠神经干细胞增殖的应用方法，其特征在于，所述步骤二中提取RNA为：

(1)获取0周龄新生鼠和8周龄仔鼠肝脏组织，加入冰水混合液进行肝脏组织研磨制得组织匀浆，均浆组织完全开裂后，冰水浴条件下静止6～8min；

(2)10000r离心10～12min，取上清液，加入250ul氯仿，震荡20s，室温静止6～8min；

(3)10000r离心10～12min，取上层水相，加入异丙醇，震荡20s，室温静止16～18min，10000r离心10～12min，获得RNA。