[发明专利]Vps28基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用

权利要求书

1.细胞中VPS28基因的定点突变方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/Cas9系统进行，所述CRISPR/Cas9系统包括靶向VPS28基因的sgRNA，所述sgRNA为sgRNA1或/和sgRNA2；

所述sgRNA1的靶序列为如下A1)、A2)或A3)：

A1)序列表中序列1的第1313-1332位；

A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；

A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列；

所述sgRNA2的靶序列为如下B1)、B2)或B3)：

B1)序列表中序列1的第3118-3137位；

B2)与B1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由B1)衍生的DNA序列；

B3)在严格条件下与B1)限定的DNA序列杂交的由B1)衍生的DNA序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括向受体细胞中导入所述sgRNA和Cas9蛋白质，实现VPS28基因的突变。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述Cas9蛋白质为如下E1)、E2)或E3)：

E1)氨基酸序列是序列2的蛋白质；

E2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

E3)在E1)或E2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述受体细胞为受精卵。

5.利用权利要求1-4中任一所述的方法制备得到的VPS28基因发生突变的细胞。

6.制备VPS28基因突变动物的方法，包括：利用权利要求1-4中任一所述的方法制备VPS28基因突变的动物细胞，利用所述VPS28基因突变的动物细胞制备VPS28基因突变动物。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于：所述动物为r1)或r2)：

r1)哺乳动物；

r2)小鼠。

8.权利要求1-3中任一所述sgRNA。