[发明专利]小麦抗条锈病基因QYr.nwafu-6BL.2的连锁KASP分子标记、引物及应用

权利要求书

1.一种小麦抗条锈病基因QYr.nwafu-6BL.2的连锁KASP分子标记，其特征在于，所述分子标记为分子标记KASP-630和分子标记KASP-162；

其中，分子标记KASP-630的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，为：5’-gagcgagtgaccgagcgtacacttacaaatgatgakggccgagttactggtgagacgtaggcatatccttg-3’，且核酸序列自5’端起第36位碱基是SNP位点，其中，k为g或t；

分子标记KASP-162的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，为：5’-cattttgcttttccaaagttgacggatcgttgaaarttgtggattggaaagatgaaagatccacgatccgt-3’，且核酸序列自5’端起第36位碱基是SNP位点，其中，r为a或g。

2.一种权利要求1所述的小麦抗条锈病基因QYr.nwafu-6BL.2的连锁KASP分子标记的PCR特异性扩增引物，其特征在于，分子标记KASP-630的引物包括：

正向序列1：5’-gaaggtgaccaagttcatgctctcaccagtaactcggccc-3’，如SEQ ID NO.3所示；

正向序列2：5’-gaaggtcggagtcaacggattctcaccagtaactcggcca-3’，如SEQ ID NO.4所示；

反向序列3：5’-gagtgaccgagcgtacact-3’；如SEQ ID NO.5所示；

分子标记KASP-162的引物包括：

正向序列4：5’-gaaggtgaccaagttcatgctatctttcatctttccaatccacaat-3’，如SEQ IDNO.6所示；

正向序列5：5’-gaaggtcggagtcaacggattatctttcatctttccaatccacaac-3’，如SEQ IDNO.7所示；

反向序列6：5’-ttccaaagttgacggatcgt-3’，如SEQ ID NO.8所示。

3.一种根据权利要求1所述的小麦抗条锈病基因QYr.nwafu-6BL.2的连锁KASP分子标记在小麦抗条锈病基因定位或者检测或者小麦抗条锈病性状方面的辅助育种中的应用。

4.一种如权利要求1所述的小麦抗条锈病基因QYr.nwafu-6BL.2的连锁KASP分子标记的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，提取待测材料的基因组DNA；

S2，分别用分子标记KASP-630和分子标记KASP-162的引物组进行PCR扩增；

分子标记KASP-630的引物组包括：

正向序列1：5’-gaaggtgaccaagttcatgctctcaccagtaactcggccc-3’，如SEQ ID NO.3所示；

正向序列2：5’-gaaggtcggagtcaacggattctcaccagtaactcggcca-3’，如SEQ ID NO.4所示；

反向序列3：5’-gagtgaccgagcgtacact-3’；如SEQ ID NO.5所示；

分子标记KASP-162的引物组包括：

正向序列4：5’-gaaggtgaccaagttcatgctatctttcatctttccaatccacaat-3’，如SEQ IDNO.6所示；

正向序列5：5’-gaaggtcggagtcaacggattatctttcatctttccaatccacaac-3’，如SEQ IDNO.7所示；

反向序列6：5’-ttccaaagttgacggatcgt-3’，如SEQ ID NO.8所示；

其中，扩增体系均为：2.5μL的2×KASP V4.0 Mastermix，0.056μL引物混合溶液，DNA模板为50-100ng，ddH₂O补足5μL；每条正向引物浓度均为12mmol/L，每条反向引物浓度均为30mmol/L；

扩增程序均为：94℃15min；94℃20s；61-55℃1min，且每个循环降0.6℃，10个循环；94℃20s、55℃60s、30个循环；

S3，分别通过酶标仪使用FAM HEX ROX光束扫描和Kluster Caller分型软件对PCR扩增产物进行分型检测；

S4，采用分子标记KASP-630引物组判断所述分子标记KASP-630的SNP位点的基因型；

采用分子标记KASP-162引物组判断所述分子标记KASP-162的SNP位点的基因型；

S5，将S4中两个判断结果结合，若同时含有两种标记目标SNP“A-C”组合型，则待测小麦为候选的具有抗条锈病性状的小麦；其他情况待测小麦为候选的具有感条锈病性状的小麦；

其中，所述两种分子标记KASP-630和KSAP-162的“A-C”组合型包括AA-CC、AA-CT、AC-CC和AC-CT四种组合。