[发明专利]一种鉴别冬虫夏草真伪的引物对、试剂盒、方法及其用途

权利要求书

1.一种鉴别冬虫夏草真伪的引物对，其特征在于，所述引物对为CC-2F/CC-2R，其序列如下：

CC-2F：5′-ATTAAGTCGTGGAAATG-3′；

CC-2R：5′-GATCAGGAATAGTGGGA-3′。

2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的鉴别冬虫夏草真伪的引物对。

3.一种使用权利要求1所述的鉴别冬虫夏草真伪的引物对或权利要求2所述的试剂盒进行冬虫夏草真伪鉴别的方法。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品DNA提取液的制备；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，使用CC-2F/CC-2R引物对进行PCR扩增反应，其中反应体系包括以下组分：PrimeSTAR Max Premix；CC-2F、CC-2R引物；模板DNA溶液；

(3)琼脂糖凝胶电泳分析：若供试品电泳结果与冬虫夏草对照品电泳结果在相应位置有相同的DNA条带分布，则该供试品为冬虫夏草。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品DNA提取液的制备：取供试品粉末按照植物基因组DNA抽提方法或者使用商业植物基因组DNA提取试剂盒提取DNA；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，使用CC-2F/CC-2R引物对进行PCR扩增反应：

其中，PCR反应体系为：PrimeSTAR Max Premix 10μL，10μM的CC-2F、CC-2R引物各1μL，50ng/μL的模板DNA量为2μL，无菌双蒸水补足至20μL；

PCR反应参数为：98℃预变性1min；98℃变性15s，53℃退火15s，72℃延伸15s，35轮；最后72℃延伸5min；

(3)琼脂糖凝胶电泳分析：若供试品电泳结果与冬虫夏草对照品电泳结果显示在200～300bp之间出现相同的单一DNA条带，则该供试品为冬虫夏草。

6.一种试剂盒，其特征在于，包括CC-2F/CC-2R引物对和DCF4/DCR4引物对，其中CC-2F/CC-2R引物对和DCF4/DCR4引物对的序列如下：

CC-2F：5′-ATTAAGTCGTGGAAATG-3′；

CC-2R：5′-GATCAGGAATAGTGGGA-3′；

DCF4：5′-AGTTACCACTCCCAAACC-3′；

DCR4：5′-TGCTTGCTTCTTGACTGA-3′。

7.一种进行冬虫夏草真伪鉴别的方法，其特征在于，使用CC-2F/CC-2R引物对和DCF4/DCR4引物对进行冬虫夏草真伪鉴别，其中CC-2F/CC-2R引物对和DCF4/DCR4引物对的序列如下：

CC-2F：5′-ATTAAGTCGTGGAAATG-3′；

CC-2R：5′-GATCAGGAATAGTGGGA-3′；

DCF4：5′-AGTTACCACTCCCAAACC-3′；

DCR4：5′-TGCTTGCTTCTTGACTGA-3′。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品DNA提取液的制备；

(2)以步骤(1)中提取的DNA为模板，使用CC-2F/CC-2R引物对和DCF4/DCR4引物对进行PCR扩增反应，其中反应体系中的中的酶为2x Pfu Mix，反应体系中DCF4/DCR4引物对和CC-2F/CC-2R引物对的摩尔比例为1:2-1:4；

优选地，反应体系中的DCF4/DCR4引物对和CC-2F/CC-2R引物对的摩尔比例为1:4；

(3)琼脂糖凝胶电泳分析：若供试品电泳结果与冬虫夏草对照品电泳结果在相应位置有相同的DNA条带分布，则该供试品为冬虫夏草。