[发明专利]circARHGAP12及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断制剂

说明书

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及circARHGAP12及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断制剂。首次发现circARHGAP12在鼻咽癌临床组织样本和细胞系中高表达，且能促进鼻咽癌细胞的侵袭与转移，提示circARHGAP12可能成为鼻咽癌诊断标记物，以及用于制备诊断鼻咽癌的试剂。具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种环状RNA circARHGAP12及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断制剂。

背景技术

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种高转移的恶性肿瘤，具有不同的发病机制和组织病理学表现。遗传易感性，表观遗传，种族衍生，地理分布，环境因素和EBV病毒感染导致NPC的恶性。鼻咽癌的发生有明显的区域特征，东南亚特别是华南和北非的病例占多数。NPC的治疗策略主要是放疗辅以化疗。虽然早期NPC患者的5年总生存率高达95％，但鼻咽和颈淋巴结复发率为8.6％～23.7％。这是由于NPC的发生和发展涉及复杂的基因调控和多阶段过程，其分子机制尚不清楚，加之肿瘤异质性和放疗抵抗引起的个体差异，传统放疗的治疗效果不是非常的理想。因此，研究治疗鼻咽癌的治疗靶标和诊断的分子标记物至关重要。

circRNA主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体mRNA(precursormessenger RNA,pre-mRNA)反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形成环状套索结构的非编码RNA分子。

CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化(exon circularization)和内含子环化(intron circularization)两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lariat-driven circularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-driven circularization)两种形成方式，套索驱动环化是外显子3’端作为剪接供体(splice donor)攻击5’端剪接受体(splice receptor),Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNA(circular intronic RNA,ciRNA)。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。

CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后Hsu MT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。发现更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该技术领域的国际竞争力。

我们检测到一个长度为794bp的circARHGAP12。通过实验发现该环状RNA在鼻咽癌中高表达且能促进鼻咽癌的侵袭转移，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。

发明内容

本发明发现了一个大小794bp的circARHGAP12，并发现了它与鼻咽癌之间存在的关系，有可能作为鼻咽癌诊断标记物和治疗的靶点。

本发明的第一个目的是提供一种环状RNA circARHGAP12，序列如SEQ ID NO.1所示。