[发明专利]一种检测禽流感病毒AIV不同亚型的特异性引物组、试剂盒以及方法

权利要求书

1.一种检测禽流感病毒AIV不同亚型的特异性引物组，其特征在于，包括N2-F和N2-R；H5-F和H5-R以及H9-F和H9-R；

所述N2-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述N2-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述H5-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述H5-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述H9-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述H9-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组中的N2-F、N2-R、H5-F、H5-R、H9-F和H9-R引物的使用浓度独立为15～25μmol/μL。

3.一种检测禽流感病毒AIV不同亚型的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增缓冲液、重组酶聚合酶、ddH₂O和醋酸镁。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增缓冲液为RehydrationBuffer。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述醋酸镁的浓度为250～300mmoL/L。

7.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照品和阳性对照品。

8.一种非疾病诊断目的的检测禽流感病毒AIV不同亚型的方法，包括以下步骤：

1)按照TwistAmp DNAAmplification Kits试剂盒操作说明，将待测样品的DNA、引物组、Rehydration buffer和ddH₂O混匀后加入醋酸镁获得扩增体系；

2)将所述扩增体系置于40℃进行扩增15min后，冷却至20～30℃；混匀后，置于40℃进行再次扩增35min获得扩增产物；

3)收集步骤2)中获得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，若琼脂糖凝胶电泳出现226bp和366bp两条带，则待测样品为H5N2亚型；若琼脂糖凝胶电泳出现226bp和460bp两条带，则待测样品为H9N2亚型。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的扩增体系以50μL计，包括待测样品的DNA 10μL、引物组2.4μL、扩增缓冲液29.5μL、ddH₂O 5.6μL和醋酸镁2.5μL。