[发明专利]一种用于荧光定量PCR检测结核分枝杆菌复合群的引物探针及方法

权利要求书

1.一种用于荧光定量PCR检测结核分枝杆菌复合群的引物，其特征在于，包括两套上游引物和下游引物，其序列分别如下：

上游引物IS-F1：5’-CCTGCGAGCGTAGGCGTCGG-3’(SEQ ID NO：1)

下游引物IS-R1：5’-CTCGTCCAGCGCCGCTTCGG-3’(SEQ ID NO：2)

上游引物IS-F2：5’-GCCGAACAACACGACGAATGGA-3’(SEQ ID NO：3)

下游引物IS-R2：5’-GGTGGCAGTCTAGGTGGTCAGT-3’(SEQ ID NO：4) 。

2.包含权利要求1所述引物的结核分枝杆菌复合群荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，包括如下组分：

上游引物IS-F1、IS-F2，下游引物IS-R1、IS-R2和探针IS-FAM1、IS-FAM2；

所述探针的序列如下：

探针IS-FAM1：5’-F-AGGCCACGTAGGCGAACCCTGCCC-Q-3’(SEQ ID NO：5)

探针IS-FAM2：5’-F-ACGGCGCTACCTGGGCCTCGAGG-Q-3’(SEQ ID NO：6)

其中F＝FAM Q＝BQ1 。

3.根据权利要求2所述的结核分枝杆菌复合群荧光定量PCR检测试剂，其特征在于，所述25μL检测试剂中，含有10μM上游引物IS-F1，10μM上游引物IS-F2，10μM下游引物IS-R1，10μM下游引物IS-R2，8μM探针IS-FAM1，8μM探针IS-FAM2。

4.根据权利要求2-3任一项所述检测试剂荧光定量PCR检测结核分枝杆菌复合群的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将待检测基因样本与PCR Mix以及所述检测试剂混合，放置在荧光定量PCR仪器中，PCR扩增程序采用touchdown的程序，具体为：

Touchdown循环程序：94℃ 10S，71℃ 15S(每个循环下降1℃)，72℃ 15S，共10个循环，接着40个循环，94℃ 10S，61℃ 30S(进行FAM荧光检测)，72℃ 15S。

5.根据权利要求4所述的荧光定量PCR检测结核分枝杆菌复合群的方法，其特征在于，所述仪器为荧光定量PCR仪器。