[发明专利]具有突变的CD28共刺激性结构域的嵌合抗原受体

说明书

本文公开可与过继性细胞转移一起使用以靶向和杀死癌症的嵌合抗原受体(CAR)多肽，包含具有例如通过减少CAR‑T细胞衰竭来增强CAR‑T细胞功能的CD28的细胞质结构域的突变形式的共刺激信号传导区域。还公开被工程化以表达这些CAR的免疫效应子细胞，例如T细胞或自然杀伤(NK)细胞。因此，还公开向患有肿瘤相关的抗原表达的癌症的受试者提供抗肿瘤免疫力的方法，所述方法涉及被工程化以表达公开的CAR的所公开的免疫效应子细胞的过继转移。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年7月7日提交的美国临时申请号62/529,919的优先权，其全部内容通过引用合并于此。

序列表

本申请包含以电子形式提交的序列表，该序列表是在2018年7月7日创建的名为“320803_2160_序列表_ST25”的ASCII.txt文件。序列表的内容全文并入本文。

背景技术

手术、放射疗法和化学疗法已成为治疗包括白血病、实体瘤和转移癌在内的癌症的标准方法。作为常规癌症治疗的辅助手段，已经研究直接或间接利用人体免疫系统来缩小或根除癌症的免疫疗法(有时称为生物疗法、生物治疗法或生物反应调节剂疗法)。人们认为，人类免疫系统是用于癌症治疗的未开发资源，一旦正确利用免疫系统的组成部分，就可以开发出有效的治疗方法。

抗癌T细胞疗法的一项重大进步是嵌合抗原受体(CAR)，它是一种单链可变片段(scFv)，其衍生自与T细胞受体(TCR)信号信号结构域融合的抗体(Davila,M.L.,et al.,Oncoimmunology,2012.1(9):1577-1583)。第一代CAR的细胞内结构域仅包含CD3δ，而第二代CAR也包括共刺激性结构域，例如CD28或41BB。这些第二代CAR结构域支持在小鼠中高效杀死肿瘤，并导致对患者的CAR T细胞疗法进行临床评估。据报道，针对B19急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的患者，其完全缓解率达到90％，从而证实靶向CD19的CAR T细胞的潜力(Davila,M.L.,et al.,Sci Transl Med,2014.6(224):224ra25；Maude,S.L.,et al.,NEngl J Med,2014.371(16):1507-17)。然而，不良的CAR T细胞持久性和过度的T细胞活化分别导致复发和严重的毒性，这表明了解CAR T细胞生物学的关键需求(Gangadhar,T.C.and R.H.Vonderheide,Nat Rev Clin Oncol,2014.11(2):91-9)。此外，在所有第二代CAR中都发现了复发和毒性，这表明在CAR中添加共刺激性结构域可提高疗效，但以生物并发症为代价。

发明概述

如本文所公开的，具有CD28共刺激性结构域的CAR T细胞在CM细胞中倾向于低水平的强直信号和耗尽表型，并且突变某些CD28亚结构域不能消除CAR信号或细胞因子的产生。因此，可以通过调节CD28共刺激来改善第二代CAR T细胞功能。

本文公开可与过继性细胞转移一起使用以靶向和杀死癌症的嵌合抗原受体(CAR)多肽。公开的CAR包括共刺激性信号传导区域，该共刺激性信号传导区域包括增强CAR-T细胞功能的CD28的细胞质结构域的突变形式。在一些实施方案中，突变形式减少CAR-T细胞的衰竭。CD28结构域包括调节TCR刺激后的信号传导途径的3个细胞内亚结构域(YMNM(SEQ IDNO:1)、PRRP(SEQ ID NO:2)和PYAP(SEQ ID NO:3))。在一些实施方案中，公开的CAR包括增强CAR-T细胞功能(例如减少CAR-T细胞衰竭)的这些亚结构域中一个或多个的突变或缺失。在一些实施方案中，CAR多肽还包括增强CAR T细胞功能的CD3δ和/或41BB中的一种或多种缺失或突变。

至于其他CAR，公开的CAR多肽在胞外结构域中包含配体结合结构域，例如可以结合表达肿瘤相关抗原(TAA)的癌细胞的试剂。公开的多肽还可以包含能够激活免疫效应子细胞的跨膜结构域和胞内结构域。例如，胞内结构域可以包含细胞内信号传导结构域和任选的一个或多个共刺激信号传导区域。