[发明专利]经遗传修饰的表达海藻糖酶的酵母及使用此类经遗传修饰的酵母的发酵方法

权利要求书

1.一种经遗传修饰的酵母，其包含编码与以下多肽序列中的至少一个具有至少80％的序列同一性的海藻糖酶(EC 3.2.1.28)多肽的异源基因：SEQ ID NO：1(乳酸克鲁维酵母)、SEQ ID NO：2(近平滑假丝酵母)、SEQ ID NO：3(光滑假丝酵母)或SEQ ID NO：87(稻瘟病菌)，

其中当所述酵母存在于包含海藻糖的发酵培养基中时，所述酵母能够产生乙醇，并且所述酵母以足以在所述乙醇滴度为至少110g/L时将发酵液的海藻糖含量降低至小于2g/L的量分泌海藻糖酶。

2.如权利要求1所述的酵母，其中由所述酵母编码的所述海藻糖酶多肽包含与SEQ IDNO：83具有至少70％、80％、90％或95％的序列同一性的序列。

3.如权利要求1-2中任一项所述的酵母，其中由所述酵母编码的所述海藻糖酶多肽包含与SEQ ID NO：84和/或SEQ ID NO：85具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少94％或100％的序列同一性的序列。

4.如权利要求1-3中任一项所述的酵母，其中所述酵母是经遗传修饰的酿酒酵母。

5.如权利要求1-4中任一项所述的酵母，其中由所述酵母编码的所述海藻糖酶包含MFα2信号序列。

6.如权利要求5所述的酵母，其中所述MFα2信号序列是SEQ ID NO：4。

7.如权利要求6所述的酵母，其中所述MFα2信号序列与SEQ ID NO：4具有至少84％、89％或94％的序列同一性。

8.如权利要求1-7中任一项所述的酵母，其中由所述酵母编码的所述海藻糖酶与以下多肽序列中的至少一个具有至少85％、90％、95％或97％的序列同一性：SEQ ID NO：8、SEQID NO：11、SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：92。

9.如权利要求1-8中任一项所述的酵母，其还包含编码葡糖淀粉酶(EC 3.2.1.3)多肽的异源基因。

10.如权利要求1-9中任一项所述的酵母，其中所述酵母以足以在所述乙醇滴度为至少为110g/L时，将发酵液中的海藻糖含量降低至小于0.5g/L或1g/L的量分泌海藻糖酶。

11.如权利要求1-10中任一项所述的酵母，其中所述酵母能够在细胞外分泌所述海藻糖酶。

12.如权利要求1-11中任一项所述的酵母，其中由所述酵母编码的所述海藻糖酶多肽包含与SEQ ID NO：86具有至少76％、至少84％、至少92％或100％的序列同一性的序列。

13.如权利要求1-12中任一项所述的酵母，其中所述酵母能够以80g/L、90g/L、100g/L、110g/L、120g/L、125g/L、130g/L、135g/L或更高的滴度产生乙醇。

14.一种用于生产乙醇的方法，所述方法包括：

使用经遗传修饰的酵母使培养基发酵，其中所述酵母包含编码与以下多肽序列中的至少一个具有至少80％的序列同一性的海藻糖酶(EC 3.2.1.28)多肽的异源海藻糖酶基因：SEQ ID NO：1(乳酸克鲁维酵母)、SEQ ID NO：2(近平滑假丝酵母)、SEQ ID NO：3(光滑假丝酵母)或SEQ ID NO：87(稻瘟病菌)，

其中如接种后36小时所测量的，所述乙醇滴度为至少105g/L，并且发酵结束时所述发酵液的所述海藻糖含量小于2g/L。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述酵母是如权利要求1-13中任一项所述的酵母。