[发明专利]无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒

说明书

本发明提供一种无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，涉及医学检测技术、生物技术及临床分子诊断技术领域，该试剂盒包含有：(1)正向和反向引物：所述正向引物为MTHFR‑CUT‑F所示序列的核苷酸链或其互补链；所述反向引物为MTHFR‑CUT‑A所示序列的核苷酸链或其互补链；正向引物MTHFR‑CUT‑F，序列：5’‑GCCTCTCCTGACTGTCATCC‑3’；反向引物MTHFR‑CUT‑A，序列：5’‑AGGACGGTGCGGTGAGAGTG‑3’；(2)反应试剂；(3)包含rs1801133 CC、CT和TT基因型的质粒，作为阳性对照，以及阴性对照：去离子水。本发明以一个聚合酶链式反应，通过实时荧光定量检测来判断基因型。本发明仅需普通引物，无需探针，生产成本较低，有利于市场推广和产业化。

技术领域

本发明涉及医学检测技术、生物技术及临床分子诊断技术领域，具体地说是一种无创5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)rs1801133基因型快速分型检测试剂盒,具体涉及无需创伤采血，采用口腔上皮细胞等样品即可检测5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因并分型的检测试剂盒及其临床应用。

背景技术

5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolatereductase，MTHFR)，主要作用是在叶酸代谢通路中将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。5-甲基四氢叶酸可以进一步进入甲基传递通路，通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平。此外叶酸的中间代谢产物在核苷酸合成过程中也有重要的作用，通过一碳单位代谢为嘌呤环的形成提供碳原子。

MTHFR是叶酸代谢限速酶，催化5，10-亚甲基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸，从而在叶酸代谢、DNA甲基化及修复中起重要作用。MTHFR基因变异引起的MTHFR酶活性降低可阻抑同型半胱氨酸转化为甲硫氨酸，导致低叶酸血症和高同型半胱氨酸血症，从而增加新生儿出生缺陷风险或自发性流产等风险，以及成年人的癌症、心血管疾病等疾病的发生。

MTHFR的rs1801133(C677T)是一种C>T错义突变，引起MTHFR基因编码的蛋白质第222个氨基酸由Ala变为Val，导致酶活性和热稳定性下降。这种突变在亚洲人群很常见，所以具有较高的检测意义。若以个体的rs1801133CC基因型时其MTHFR活性为100％、CT基因型的活性则为CC基因型的小于65％，TT基因型只有小于30％。因此，rs1801133与叶酸代谢相关疾病密切相关。rs1801133T等位基因携带者因叶酸代谢能力较弱(特别是TT基因型)，需加大叶酸服用剂量方能有效达到降低出生缺陷和高血压患者中风、心肌梗死和死亡风险。

Wilson等和Moslev等的研究表明，妊娠妇女体内叶酸缺乏是神经管缺陷(neuraltube defects，NTDs)的一个重要危险因素。母亲在妊娠期胎儿器官形成的关键时期增补叶酸可有效降低胎儿发生NTDs的危险性。此外、MTHFR基因的缺陷对孕妇人群会引起神经管缺陷、先天性心脏病、唇腭裂、妊娠期高血压疾病、自发性流产、癌症、心脑血管疾病等多种病症

叶酸属于B族维生素，人体不能合成叶酸，必须依靠外源性供给。叶酸在人体内以四氢叶酸的形式参与氨基酸的相互转换、DNA合成等许多重要化合物的形成和代谢，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。遗传体质的差异导致了机体对叶酸利用能力的差异，因此，叶酸增补应因人而异，增补过多或过少都不利于胎儿健康和孕妇健康。从另一方面，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。研究证明，男性体内缺乏叶酸，会导致精子质量降低，精液中精子携带的染色体数量异常，引起新生儿出生缺陷。机体叶酸水平低下，也是引起不育不孕、自发性流产的重要原因之一。因此，新婚夫妇准备怀孕前，至少应该做叶酸代谢基因检测，这样更有利于优孕。因此，通过叶酸代谢基因检测，可以尽早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸。

发明内容