[发明专利]无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒

权利要求书

1.无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包含有：

( 1 )正向和反向引物：所述正向引物为MTHFR-CUT-F所示序列的核苷酸链或其互补链；所述反向引物为MTHFR-CUT-A所示序列的核苷酸链或其互补链；

正向引物MTHFR-CUT-F，序列：5’-GCCTCTCCTGACTGTCATCC-3’；

反向引物MTHFR-CUT-A，序列：5’-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3’；

( 2 )反应试剂：

A：口腔上皮DNA提取液；

B：PCR反应液：MTHFR MIX主反应液；

C：CUT反应液：Hinf I 酶及其缓冲液；

D：TBE溶液：电泳缓冲液；

E：胶粉：琼脂糖凝胶；

F：上样浓缩液：溴酚蓝配置的Loading Buffer 6X；

G：指示带：DNA Maker（1000-100bp）；

H：显色剂：Gold-View双链DNA染色剂；

( 3 )包含rs1801133 CC、CT和TT基因型的质粒，作为阳性对照，以及阴性对照：去离子水。

2.根据权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒的PCR反应体系为20μL，包括15ul MTHFR MIX主反应液，基因组DNA模板5μL；酶切反应体系为20ul，包括10ul PCR反应产物，10ul CUT反应液；上样体系6ul，包括CUT产物5ul，上样浓缩液1ul；凝胶配制方法为0.5X的TBE溶液，配制成2%浓度的琼脂糖凝胶，含显色剂。

3.根据权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒的PCR反应的条件为：

95℃预变性5分钟；

95℃变性20秒、65℃退火20秒，72℃延伸20秒，35个循环；

72℃终末延伸5分钟；

4°保存。

4.根据权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，其特征在于：CUT反应液的酶切反应的程序为：37°2小时，4°保存。

5.根据权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，其特征在于：D：TBE溶液：电泳缓冲液；电泳及分析的程序为：

120V电压，50mA，电泳30min左右，直至溴酚蓝指示带移到凝胶中部；把凝胶放入凝胶成像分析系统，实验结果应于图1所示类似，其中CC型条带为282bp，TT型条带为176bp及106bp，CT型条带为282bp、176bp及106bp。

6.根据权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒的检测结果，对有效扩增且阴阳性对照均符合预其时，样品检测结果可信，否则检测实验需要重复；样本扩增异常，酶切异常，需排除人为操作和仪器故障等问题后重新进行检测实验。

7.一种用于叶酸代谢相关基因MTHFR遗传变异检测的引物对，该引物对包括正向引物和反向引物，所述正向引物MTHFR-CUT-F所示序列的核苷酸链或其互补链；所述反向引物为MTHFR-CUT-A所示序列的核苷酸链或其互补链；

正向引物MTHFR-CUT-F，序列：5’-GCCTCTCCTGACTGTCATCC-3’；

反向引物MTHFR-CUT-A，序列：5’-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3’。

8.一种用于叶酸代谢相关基因MTHFR遗传变异检测的阳性质控，扩增序列连接到了空质粒载体当中，并进行了基因测序，包含野生、突变两种序列完全正确的质粒，以及其混合物。

9.权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，在制备预防出生缺陷产品以及预防高血压患者中风产品中的应用。

10.权利要求1所述的无创rs1801133基因型快速分型检测试剂盒，在制备用于筛查叶酸缺乏高危人群的产品中的应用。