[发明专利]一种杀螟硫磷的抗体的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种直接识别杀螟硫磷抗体的制备方法和应用。本发明的杀螟硫磷的半抗原，其结构式如式（II）或（I）所示：；。进而通过将半抗原偶联到载体蛋白上，成功制备得到两种的人工抗原。利用其中一种人工抗原免疫动物，制备能分泌抗杀螟硫磷抗体的杂交瘤细胞；利用其中一种人工抗原作为包被原，进一步建立一种基于间接竞争酶联免疫法的杀螟硫磷的检测方法。本检测方法检测杀螟硫磷农药残留具有简便快速、特异性强、灵敏度较高的特点，检测的IC₅₀值为7.13 ng/mL，检测限为（IC₁₀）1.7 ng/mL，线性检测范围为2.9～17.9 ng/mL。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，更具体地，涉及一种直接识别杀螟硫磷的抗体的制备方法和应用。

背景技术

我国是农业大国，每年在农业产生中消耗大量农药，残留的农药易造成环境污染和食物急性中毒等严重问题。杀螟硫磷属于有机磷类农药，是目前广泛使用的杀虫剂之一。针对杀螟硫磷检测，目前仪器分析法是主要的分析方法，但仪器分析法需要昂贵的仪器、专人操作与维护、复杂前处理，并且无法实现现场快速检测。为弥补仪器分析法缺点，有必要开发出一种可以实现快速高通量筛查的分析方法，用于现场快速检测。

免疫分析法是基于抗原与抗体特异性、可逆性结合反应的分析技术。免疫反应涉及抗原与抗体分子间高度互补的立体结构、静电、氢键和范德华力等的综合作用，具有任何一种单独理化分析技术难以达到的选择性和灵敏度，因此具有灵敏度与常规的仪器分析一致、适合现场筛选、简单、快速、成本低、样品所需量少等优点，被认为是21世纪最具竞争性和挑战性的快速检测技术。世界粮农组织(FAO)已向许多国家推荐此项技术。美国化学学会(ACS)将免疫分析技术、色谱分析技术共同列为农药、兽药和渔药残留分析的主要技术。

目前尚无一种针对杀螟硫磷的酶联免疫检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种直接识别杀螟硫磷抗体的制备方法和应用。

本发明的第一个目的是提供一种杀螟硫磷的半抗原。

本发明的第二个目的是提供所述的半抗原的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种杀螟硫磷的完全抗原。

本发明的第四个目的是提供所示完全抗原的制备方法。

本发明的第五个目的是一种杀螟硫磷抗体。

本发明的第六个目的是所述半抗原、所述完全抗原、和/或所述抗体在检测杀螟硫磷或制备检测杀螟硫磷试剂盒中的应用。

本发明的第七个目的是一种基于间接竞争酶联免疫法的杀螟硫磷的检测方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种杀螟硫磷的半抗原，其结构式如式(II)或(I)所示：

所述的半抗原的制备方法，包括以下步骤：

S1.3-甲基-4-硝基苯酚与O-甲基硫代磷酰二氯的二氯甲烷溶液、NaOH水溶液和四丁基溴化铵混合，搅拌，反应12～16h，经过胶层析柱纯化，流动相为体积比为石油醚：乙酸乙酯＝1～10：1的混合溶液，纯化后即得式(II)所示化合物；

S2.式(II)所示化合物与6-氨基己酸加入到1，4-二氧六环，搅拌，0℃冰浴下加入NaOH溶液，使溶液维pH10～11，搅拌反应12～16h，即得式(I)所示化合物。

优选地，硅胶层析柱为400目硅。

优选地，3-甲基-4-硝基苯酚与O-甲基硫代磷酰二氯的二氯甲烷溶液与NaOH水溶液的体积比为1～2：1～2。