[发明专利]一种基于高通量测序检测人DNA TCR beta链免疫组库的方法及其专用引物组

说明书

本发明公开了一种基于高通量测序检测人DNA TCR beta链免疫组库的方法及其专用引物组。本发明保护一种引物组，由序列表的序列1至序列45所示的45条引物组成。本发明还保护一种建立DNA文库的方法，依次包括如下步骤：(1)以待测样本的基因组DNA为模板，采用所述引物组进行PCR扩增，回收扩增产物；(2)以扩增产物为模板，采用测序平台的通用上游引物和测序平台的通用下游引物进行PCR扩增，回收扩增产物，即为人DNA中编码TCRβ链免疫组库的DNA文库。本发明中提供的引物组可以实现在一管中进行多重PCR扩增。采用本发明提供的引物组或方法获得TCRβ链免疫组库，具有灵敏度高、特异性高、可重复性高、实验成本低的优势。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于高通量测序检测人DNA TCR beta链免疫组库的方法及其专用引物组。

背景技术

T细胞依赖抗原主要组织相容性复合体分子(MHC)和T细胞受体(TCR)的相互作用介导抗原识别。TCRs是高度多样性的异质二聚体，由两条肽链组成(α链和β链，偶见γ链和δ链)。每条肽链均由可变区和恒定区组成，可变区在抗原识别的过程中起到重要作用。α链(或δ链)的可变区由V区和J区组成，β链(或γ链)的可变区由V区、D区和J区组成。因为不同的VDJ亚型重排在一起，加上在重排的过程中会伴有插入缺失等突变变异的发生等因素导致了VDJ重排的种类数大幅提升，最终构成了一个庞大的免疫组库群体。

随着疾病的发生和发展，TCR免疫组库可能会发生很大的变化，这就是为什么现在不同疾病条件下免疫组库状态越来越受到关注的原因，如癌症、自身免疫、炎症和传染病。而研究免疫组库多样性的主要难点也在于其多样性，理论上TCR VDJ重排组合形式能达到10的10-20次方。

基于研究的目标不同，不同的起始材料也各有优缺点。基因组DNA具有更高的稳定性，而且在每个细胞里面都是单一模板，能够更好的进行单克隆TCR定量。然而基因组DNA模板无法提供目标基因的表达信息，同时可能会受到内含子带来的影响。当用RNA作为起始模板的时候，单克隆TCR定量因为多个TCR转录本会带来很多偏差，而且不得不面对样本容易降解的问题。

高通量测序，是将DNA分子进行随机片段化、加接头，制备测序文库，通过对文库中bridge amplification形成的克隆进行延伸反应，检测对应的信号，最终获得序列信息。相比于一代Sanger测序，高通量测序能够一次对几十万到几百万条DNA进行测序，处理大规模样本时具有显著地优势，耗时也较一代测序短很多，是目前研究基因序列主要的技术手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于高通量测序检测人DNA TCR beta链免疫组库的方法及其专用引物组。

本发明保护一种引物组(引物组甲)，由如下45条引物组成：