[发明专利]从鱼油中分离制备反式棕榈油酸的方法

说明书

本发明涉及一种从鱼油中分离制备反式棕榈油酸的方法，步骤如下：对鱼油进行皂化处理，得皂化后的混合游离脂肪酸，采用尿素包和的方法，在有机溶剂中包和混合脂肪酸中的饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸，低温尿素结晶，分离出尿素包和固体，在有机溶剂或酸性溶剂中，或升高温度解包和作用，浓缩有机溶剂，得到饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸的混合物，经过柱层析，分离得到反式棕榈油酸。本方法操作简单，从鱼油中分离制备得到反式棕榈油酸，是首次从鱼油中发现并分离得到反式棕榈油酸的方法。

技术领域

本发明涉及一种从鱼油中分离制备反式棕榈油酸的方法。

背景技术

棕榈油酸(Palmitoleic acid)是一种16碳的单不饱和脂肪酸(monounsaturatedfatty acid，MUFA)，双键位于碳端的第7个碳原子上(16:1,n-7)，近年来，棕榈油酸在一些慢性疾病如糖尿病、代谢综合症和炎症中具有治疗作用，引起人们广泛关注。顺式棕榈油酸在大多数动植物种均有分布，但含量较高的物种稀少，现其主要来源为沙棘果油，鱼油和一些海洋浮游生物，在鱼油中，棕榈油酸的含量约有15％～20％，可作为棕榈油酸的制备原料。

反式棕榈油酸是顺式棕榈油酸的同分异构体(顺反异构体)，近几年反式棕榈油酸在牛乳中被发现，具有调节糖脂代谢的作用，被当做II型糖尿病和冠心病的生物标志物。寻找其他含反式棕榈油酸物种，以便分离获得更多的反式棕榈油酸物种具有重要的经济意义和理论研究价值。

传统从鱼油中提取棕榈油酸的制备方法如中国专利申请CN105461539所报道的制备方法得到的棕榈油酸为顺式棕榈油酸。

发明内容

本发明的目的在于尝试采用不同制备方法，期望从鱼油、沙棘果油等天然原料中分离制备得到天然反式棕榈油酸。

本发明首次发现鱼油中含有反式棕榈油酸，而沙棘果油中并未检测到反式棕榈油酸的存在。分离制备反式棕榈油酸，用于深入研究反式棕榈油酸及顺反异构体的活性及作用机制的差异性，以及后期的开发利用具有重要的意义。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

从鱼油中分离制备反式棕榈油酸的方法，包括以下步骤：

(1)皂化往鱼油中加入有机溶剂和碱，加热解离后，使得鱼油中的脂肪酸处于游离状态，再进行酸化处理，分离出油层部分，得到混合脂肪酸；

(2)尿素包和尿素及极性有机溶剂混合，加热溶解使澄清后加入混合脂肪酸，搅拌混匀，冷却至室温后，于0-20℃静置使结晶，0-20℃下离心或抽滤得尿素包和固体；

(3)解包和往尿素包和固体中加入酸溶液和酯类溶剂混合溶剂中，加热使解包和，脂肪酸游离至有机层，分离有机层，得到饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸的混合物；

(4)柱层析采用柱层析的方法分离制备反式棕榈油酸，柱色谱条件为：固定相为300-400目硅胶，展开剂为石油醚与乙酸乙酯体积比为(10-20):1，上样样品与固定相比例为1:(20-35)，反式棕榈油酸HPLC纯度≥80％。

进一步地，步骤(1)为鱼油的皂化反应，其采用常规皂化方法即可，皂化反应采用有机溶剂可为常用有机溶剂醚类溶剂如四氢呋喃、酯类溶剂如乙酸乙酯、醇类溶剂如甲醇或乙醇等。所述鱼油(g)：有机溶剂(ml)：碱(g)的比例为1：(0.7-2)：(0.1-0.8)。

在一些实施例中，所述步骤(2)中尿素包和的具体步骤为：尿素与甲醇混合，比例为1g/(2-8)ml，加热30-60℃使澄清，将混合脂肪酸加入甲醇溶剂中，30-60℃状态下充分混合15-45min，冷却至室温，0-20℃冷藏4-15h后快速抽滤，得到尿素包和固体；

在一些实施例中，步骤3)中所述尿素包和固体与混合溶剂的比例为1:(0.2-4)(g:ml)；